| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-19页 |
| ·反式-4-羟脯氨酸概述 | 第9页 |
| ·反式-4-羟脯氨酸的应用 | 第9-10页 |
| ·反式-4-羟脯氨酸在医药方面的应用 | 第9页 |
| ·反式-4-羟脯氨酸在化工方面的应用 | 第9页 |
| ·反式-4-羟脯氨酸在食品营养方面的应用 | 第9-10页 |
| ·反式-4-羟脯氨酸在美容业方面的应用 | 第10页 |
| ·反式-4-羟脯氨酸生产 | 第10-12页 |
| ·生物提取法 | 第10页 |
| ·微生物酶法 | 第10-12页 |
| ·重组大肠杆菌外源蛋白的高效表达 | 第12-14页 |
| ·表达质粒和宿主 | 第12页 |
| ·启动子 | 第12-13页 |
| ·密码子组成和转录翻译效率 | 第13页 |
| ·发酵工艺的控制 | 第13-14页 |
| ·重组大肠杆菌高密度发酵 | 第14-16页 |
| ·碳源 | 第14-15页 |
| ·氮源 | 第15页 |
| ·无机盐和金属离子 | 第15页 |
| ·温度 | 第15-16页 |
| ·溶解氧浓度 | 第16页 |
| ·国内外研究现状 | 第16-17页 |
| ·本课题研究意义和研究内容 | 第17-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-34页 |
| ·材料 | 第19-21页 |
| ·菌种和质粒 | 第19页 |
| ·实验试剂 | 第19-20页 |
| ·仪器和设备 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·主要试剂配制 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21-34页 |
| ·密码子优化策略 | 第21-22页 |
| ·脯氨酸4-羟化酶基因和色氨酸串联启动子的全基因合成 | 第22页 |
| ·大肠杆菌高效感受态的制备14 | 第22-23页 |
| ·重组质粒的构建 | 第23-25页 |
| ·酶切鉴定阳性重组质粒 | 第25页 |
| ·DNA测序检测重组质粒 | 第25页 |
| ·产物的纯化 | 第25-26页 |
| ·质粒的提取 | 第26页 |
| ·重组大肠杆菌全细胞酶活的测定 | 第26页 |
| ·种子培养方法 | 第26页 |
| ·平板、种子和摇瓶发酵培养方法 | 第26页 |
| ·重组大肠杆菌生长曲线的绘制 | 第26页 |
| ·重组大肠杆菌发酵曲线的绘制 | 第26页 |
| ·反式-4-羟脯氨酸标准曲线的绘制 | 第26-27页 |
| ·反式-4-羟脯氨酸摇瓶发酵优化单因素实验 | 第27-29页 |
| ·发酵液OD_(600)的测定 | 第29页 |
| ·氯胺T法测定反式-4-羟脯氨酸 | 第29页 |
| ·发酵罐补料分批发酵方法 | 第29-30页 |
| ·发酵液中残留葡萄糖的测定 | 第30页 |
| ·透明颤菌血红蛋白基因在重组大肠杆菌中的克隆 | 第30-32页 |
| ·菌落PCR验证 | 第32页 |
| ·CO差异光谱法血红蛋白活性 | 第32页 |
| ·引入VHb的重组大肠杆菌摇瓶发酵 | 第32-34页 |
| 第三章 结果和讨论 | 第34-57页 |
| ·脯氨酸4-羟化酶基因的优化设计和合成 | 第34-38页 |
| ·脯氨酸4-羟化酶基因密码子优化 | 第34-36页 |
| ·脯氨酸4-羟化酶基因mRNA二级结构优化 | 第36-38页 |
| ·高产反式-4-羟脯氨酸重组大肠杆菌的构建以及宿主菌和质粒的优化 | 第38-42页 |
| ·高产反式-4-羟脯氨酸重组大肠杆菌的构建 | 第38-39页 |
| ·宿主菌的优化 | 第39-40页 |
| ·质粒优化 | 第40-42页 |
| ·重组大肠杆菌BL21(DE3)/pUC19-ptrp2-Hyp摇瓶发酵条件的优化 | 第42-49页 |
| ·重组大肠杆菌BL21(DE3)/pUC19-ptrp2-Hyp的生长曲线测定 | 第42页 |
| ·重组大肠杆菌的发酵曲线 | 第42-43页 |
| ·重组大肠杆菌单因素摇瓶发酵条件的优化 | 第43-48页 |
| ·底物L-脯氨酸浓度的优化 | 第43-44页 |
| ·接种量的优化 | 第44页 |
| ·不同有机氮源的优化 | 第44-45页 |
| ·培养温度的优化 | 第45页 |
| ·亚铁离子浓度的优化 | 第45-46页 |
| ·镁离子浓度的优化 | 第46-47页 |
| ·不同碳源的优化 | 第47-48页 |
| ·正交实验结果及分析 | 第48-49页 |
| ·重组大肠杆菌补料分批发酵法生产反式-4-羟脯氨酸 | 第49-53页 |
| ·间歇补料分批发酵生产反式-4-羟脯氨酸 | 第49-51页 |
| ·匀速流加发酵生产反式-4-羟脯氨酸 | 第51-53页 |
| ·VHb在重组大肠杆菌中的克隆和表达及对产酸的影响 | 第53-57页 |
| ·透明颤菌血红蛋白在重组大肠杆菌中的克隆 | 第53-55页 |
| ·CO差异光谱分析重组大肠杆菌血红蛋白活性 | 第55页 |
| ·血红蛋白对重组大肠杆菌生产反式-4-羟脯氨酸的影响 | 第55-57页 |
| 主要结论与展望 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第65页 |
