| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 第一章 研究背景和立题依据 | 第13-30页 |
| ·胆固醇氧化酶概述 | 第13-16页 |
| ·胆固醇氧化酶的催化机制 | 第13-14页 |
| ·胆固醇氧化酶的分类和来源 | 第14-16页 |
| ·胆固醇氧化酶的异源表达 | 第16-18页 |
| ·胆固醇氧化酶的应用 | 第18-20页 |
| ·药物合成 | 第18页 |
| ·临床检测 | 第18-19页 |
| ·农业生产 | 第19-20页 |
| ·食品开发 | 第20页 |
| ·外源蛋白在E.coli中的可溶性表达 | 第20-24页 |
| ·外源蛋白分泌表达 | 第21页 |
| ·低温诱导表达 | 第21-22页 |
| ·选择合适的宿主 | 第22页 |
| ·向培养基中添加辅助因子 | 第22-23页 |
| ·融合表达 | 第23页 |
| ·目标蛋白与分子伴侣共表达 | 第23-24页 |
| ·乳酸菌食品级诱导表达系统 | 第24-28页 |
| ·NICE系统的构建原理 | 第25-26页 |
| ·NICE系统的组成 | 第26-28页 |
| ·NICE系统用于调控型基因表达的优点 | 第28页 |
| ·本研究的立题依据和研究内容 | 第28-30页 |
| ·立题依据 | 第28-29页 |
| ·研究内容 | 第29-30页 |
| 第二章 胆固醇氧化酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 | 第30-45页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·材料与方法 | 第30-36页 |
| ·菌株,质粒与培养基 | 第30-31页 |
| ·仪器和试剂 | 第31-32页 |
| ·引物设计 | 第32页 |
| ·Bcod的扩增 | 第32页 |
| ·克隆、测序与序列分析 | 第32-33页 |
| ·表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·重组大肠杆菌的构建 | 第34页 |
| ·BCOD在重组大肠杆菌中的表达与检测 | 第34-35页 |
| ·重组大肠杆菌的诱导条件优化 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-44页 |
| ·胆固醇氧化酶基因(Bcod)的克隆及序列分析 | 第36-38页 |
| ·异源表达Bcod的引物设计 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pET-Bcod的构建 | 第39页 |
| ·克隆载体的构建 | 第39-40页 |
| ·载体的酶切和连接 | 第40页 |
| ·连接液转化宿主菌及转化子的筛选 | 第40-41页 |
| ·重组E.coli R/Bcod目的蛋白表达结果检测 | 第41-42页 |
| ·诱导条件优化 | 第42-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| 第三章 胆固醇氧化酶和分子伴侣在大肠杆菌中的共表达 | 第45-60页 |
| ·引言 | 第45页 |
| ·材料和方法 | 第45-49页 |
| ·菌株、质粒和培养基 | 第45-46页 |
| ·仪器和试剂 | 第46页 |
| ·重组大肠杆菌的构建 | 第46-47页 |
| ·BCOD的诱导表达 | 第47页 |
| ·胞内蛋白表达情况的检测 | 第47页 |
| ·酶活力测定 | 第47-48页 |
| ·重组菌BL21/mc/Bcod表达BCOD的诱导条件优化 | 第48页 |
| ·重组菌BL21/mc/Bcod中BCOD的纯化 | 第48页 |
| ·重组菌BL21/mc/Bcod中BCOD的酶学性质分析 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-58页 |
| ·阳性转化子筛选及鉴定 | 第49-50页 |
| ·BL21/mc/Bcod和BL21/Bcod的诱导条件优化 | 第50-52页 |
| ·SDS-PAGE比较BL21/mc/Bcod和BL21/Bcod包涵体的产量 | 第52-53页 |
| ·BL21/mc/Bcod中BCOD的纯化 | 第53-55页 |
| ·BL21/mc/Bcod中BCOD的酶学性质分析 | 第55-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 第四章 胆固醇氧化酶在乳酸乳球菌中的表达 | 第60-71页 |
| ·引言 | 第60页 |
| ·材料和方法 | 第60-64页 |
| ·菌株、质粒和培养基 | 第60-61页 |
| ·仪器和试剂 | 第61页 |
| ·重组乳酸乳球菌的构建 | 第61-62页 |
| ·重组乳酸乳球菌的诱导 | 第62-63页 |
| ·重组乳酸乳球菌LSc中BCOD表达情况的测定 | 第63页 |
| ·LSc表达Beon的诱导条件优化 | 第63-64页 |
| ·LSc粗酶液中BCOD酶学性质分析 | 第64页 |
| ·结果与分析 | 第64-70页 |
| ·克隆载体pMD18-T-Bcod的构建 | 第64页 |
| ·表达载体pSEC-Bcod的构建 | 第64-65页 |
| ·LSc中BCOD的表达情况分析 | 第65-66页 |
| ·LSc的诱导条件优化 | 第66-70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| 第五章 重组乳酸乳球菌LSc降解胆固醇的研究 | 第71-80页 |
| ·引言 | 第71-72页 |
| ·材料和方法 | 第72-74页 |
| ·菌株和培养基 | 第72页 |
| ·仪器和试剂 | 第72页 |
| ·LSc对培养基中胆固醇的降解实验 | 第72-73页 |
| ·LSc粗酶液对鸡蛋黄中胆固醇的降解实验 | 第73-74页 |
| ·结果与分析 | 第74-78页 |
| ·LSc对培养基中胆固醇的降解实验 | 第74-75页 |
| ·LSc粗酶液对鸡蛋黄中胆固醇的降解 | 第75-78页 |
| ·讨论 | 第78-80页 |
| 全文总结与展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-88页 |
| 在读期间发表的论文 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第90页 |
