| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-32页 |
| ·转基因动物研究进展 | 第10-12页 |
| ·国外转基因动物发展历程 | 第10-11页 |
| ·国内转基因动物研究概况 | 第11-12页 |
| ·转基因动物的制备技术 | 第12-19页 |
| ·传统动物转基因技术 | 第13-15页 |
| ·新型发展的动物转基因技术 | 第15-19页 |
| ·哺乳动物核移植技术研究进展 | 第19-26页 |
| ·哺乳动物核移植的历史 | 第19-20页 |
| ·哺乳动物核移植技术 | 第20-24页 |
| ·哺乳动物核移植技术的应用前景和展望 | 第24-26页 |
| ·动物转基因技术应用进展 | 第26-32页 |
| ·动物转基因技术在家畜育种中的应用 | 第26-27页 |
| ·动物乳腺生物反应器 | 第27-32页 |
| 2 实验一 嗜热菌糖苷酶基因乳腺特异性表达载体构建 | 第32-41页 |
| ·实验材料 | 第32页 |
| ·仪器与耗材 | 第32页 |
| ·菌种和质粒 | 第32页 |
| ·酶、试剂和培养基 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-35页 |
| ·引物设计和PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·PCR模板的制备 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及转化程序 | 第34页 |
| ·质粒载体中克隆的步骤 | 第34-35页 |
| ·结果 | 第35-38页 |
| ·质粒pDsRed-CMV的构建 | 第35页 |
| ·质粒pDsRed-CPL的构建 | 第35-36页 |
| ·质粒pBL的构建 | 第36-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39-41页 |
| 3 实验二 牛胎儿皮肤成纤维细胞系的建立 | 第41-48页 |
| ·试验材料 | 第41页 |
| ·仪器和耗材 | 第41页 |
| ·基础药品 | 第41页 |
| ·主要试剂配方 | 第41页 |
| ·试验方法 | 第41-43页 |
| ·组织块培养法分离牛胎儿皮肤成纤维细胞 | 第41-42页 |
| ·牛胎儿皮肤成纤维细胞传代培养及纯化 | 第42页 |
| ·冷冻与复苏 | 第42-43页 |
| ·生长曲线测定 | 第43页 |
| ·核型分析 | 第43页 |
| ·结果 | 第43-46页 |
| ·牛胎儿皮肤成纤维细胞原代培养 | 第43-44页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞传代培养与纯化 | 第44页 |
| ·生长曲线测定结果 | 第44-46页 |
| ·核型分析结果 | 第46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| ·小结 | 第48页 |
| 4 试验三 转LacS细胞系的建立 | 第48-55页 |
| ·试验材料 | 第48-49页 |
| ·仪器及耗材 | 第48-49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·试验方法 | 第49-50页 |
| ·脂质体介导的细胞转染 | 第49页 |
| ·细胞G418筛选 | 第49-50页 |
| ·阳性细胞扩大培养 | 第50页 |
| ·阳性细胞分子生物学鉴定 | 第50页 |
| ·结果 | 第50-52页 |
| ·讨论 | 第52-55页 |
| ·小结 | 第55页 |
| 5 试验四 转LacS克隆胚胎构建 | 第55-67页 |
| ·试验材料 | 第55页 |
| ·仪器及耗材 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·试验方法 | 第55-58页 |
| ·牛卵母细胞体外培养体系的建立 | 第55-57页 |
| ·牛卵母细胞成熟培养 | 第55-56页 |
| ·牛卵母细胞的孤雌发育 | 第56-57页 |
| ·核供体细胞的细胞周期测定 | 第57页 |
| ·核移植构建转基因克隆胚胎 | 第57-58页 |
| ·转LscS基因核供体细胞准备 | 第57页 |
| ·转LacS基因克隆胚胎构建 | 第57-58页 |
| ·结果 | 第58-65页 |
| ·牛卵母细胞成熟培养 | 第58-59页 |
| ·牛卵母细胞的孤雌发育 | 第59-61页 |
| ·不同激活电压对牛卵母细胞的孤雌发育结果(甘露醇融合液) | 第59页 |
| ·不同脉冲时间对牛卵母细胞的孤雌发育结果 | 第59-60页 |
| ·不同融合液对牛卵母细胞的孤雌发育结果 | 第60页 |
| ·不同激活方法对牛卵母细胞的孤雌激活结果 | 第60-61页 |
| ·供体细胞细胞周期测定结果 | 第61-63页 |
| ·转基因克隆胚胎构建 | 第63-64页 |
| ·不同细胞系生产的转基因克隆胚胎的发育 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| ·小结 | 第67页 |
| 6 试验五 重构胚胎移植和新生牛鉴定 | 第67-71页 |
| ·试验材料 | 第67页 |
| ·仪器和耗材 | 第67页 |
| ·主要试剂 | 第67页 |
| ·试验方法 | 第67-69页 |
| ·转基因克隆胚胎移植 | 第67-68页 |
| ·新生牛鉴定 | 第68-69页 |
| ·结果 | 第69-70页 |
| ·转基因克隆胚胎移植妊娠结果 | 第69-70页 |
| ·新生牛初步鉴定结果 | 第70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| ·小结 | 第71页 |
| 7 结论 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-87页 |
| 附录 | 第87-89页 |
| 作者简介 | 第89页 |