| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-16页 |
| 1 引言 | 第16-40页 |
| ·绵羊肺腺瘤病概述 | 第16页 |
| ·OPA的发现与流行病学分析 | 第16-17页 |
| ·OPA的发现 | 第16页 |
| ·OPA流行病学分析 | 第16-17页 |
| ·OPA病原学 | 第17-18页 |
| ·OPA病原的确定 | 第17-18页 |
| ·OPA病原的形态与理化生性质 | 第18页 |
| ·OPA的临床症状与病理变化 | 第18-19页 |
| ·OPA的临床症状 | 第18-19页 |
| ·绵羊肺腺瘤病的病理变化 | 第19页 |
| ·OPA的诊断与防制 | 第19-20页 |
| ·OPA的诊断 | 第19页 |
| ·OPA的防治 | 第19-20页 |
| ·OPA的研究价值 | 第20页 |
| ·JSRV主要基因的的分子生物学分析 | 第20-26页 |
| ·JSRV基因结构特征 | 第20-21页 |
| ·JSRV的基因编码的蛋白 | 第21-23页 |
| ·JSRV的复制及其生活周期 | 第23-25页 |
| ·JSRV受体 | 第25-26页 |
| ·内源性反转录病毒 | 第26-28页 |
| ·内源性反转录病毒 | 第26-28页 |
| ·JSRV内源性反转录病毒干扰机制 | 第28页 |
| ·JSRV Env转化细胞的分子作用机制 | 第28-33页 |
| ·JSRV Env蛋白转化细胞不同机制 | 第29-32页 |
| ·JSRV Env蛋白转化不同细胞机制 | 第32-33页 |
| ·基因突变与肿瘤发生关系 | 第33-38页 |
| ·ras基因突变与肺癌 | 第33-35页 |
| ·pik3ca基因突变与肿瘤 | 第35-36页 |
| ·egfr基因突变与肿瘤 | 第36-37页 |
| ·p53基因突变与肿瘤 | 第37-38页 |
| ·基因甲基化修饰 | 第38页 |
| ·原核表达融合蛋白的纯化方法 | 第38-40页 |
| 2 实验一 绵羊肺腺瘤病特异性PCR检测方法的建立 | 第40-49页 |
| 摘要 | 第40-41页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·试剂与药品 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-44页 |
| ·引物设计 | 第41-42页 |
| ·绵羊基因组DNA的提取 | 第42页 |
| ·特异性PCR检测方法的建立 | 第42页 |
| ·阳性质粒的构建 | 第42-43页 |
| ·重复性和特异性实验 | 第43页 |
| ·灵敏性测定 | 第43页 |
| ·检测方法的应用 | 第43-44页 |
| ·结果 | 第44-46页 |
| ·目的片段的扩增 | 第44页 |
| ·目的序列的测定 | 第44页 |
| ·重复性、特异性和灵敏性的测定 | 第44-45页 |
| ·临床样品检测 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| ·结论 | 第48-49页 |
| 3 实验二 OPA与肿瘤相关基因突变检测关系的研究 | 第49-58页 |
| 摘要 | 第49-50页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-52页 |
| ·引物设计 | 第50-51页 |
| ·绵羊基因组DNA的提取 | 第51页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第51页 |
| ·SSCP法检测基因突变 | 第51-52页 |
| ·热激法转化连接产物 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-55页 |
| ·nras、kras、pik3ca egfr、p53基因目的外显子扩增 | 第52-53页 |
| ·PCR产物SSCP检测 | 第53页 |
| ·kras第1外显子检测 | 第53-54页 |
| ·p53第7外显子检测 | 第54页 |
| ·egfr、kras、p53及pik3ca基因的序列分析 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| ·结论 | 第57-58页 |
| 4 实验三 绵羊、山羊内源性肺腺瘤病毒全基因组序列测定与序列分析 | 第58-71页 |
| 摘要 | 第58-59页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·绵羊基因组DNA | 第59页 |
| ·试剂 | 第59页 |
| ·主要仪器 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-60页 |
| ·引物设计 | 第59-60页 |
| ·绵羊、山羊基因组DNA的提取 | 第60页 |
| ·enJSRV基因序列扩增 | 第60页 |
| ·enJSRV基因序列测定 | 第60页 |
| ·enJSRV基因序列分析 | 第60页 |
| ·结果 | 第60-68页 |
| ·绵羊、山羊内源性病毒基因片段扩增 | 第60-61页 |
| ·绵羊、山羊内源性反转录病毒基因序列分析 | 第61-67页 |
| ·GERV编码的结构蛋白性质预测 | 第67页 |
| ·enJSRN编码的结构蛋白性质预测 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| ·enJSRVN基因序列特征 | 第68-69页 |
| ·GERV基因序列特征 | 第69-70页 |
| ·结论 | 第70-71页 |
| 5 实验四 绵羊、山羊内源肺腺瘤病毒启动子甲基化修饰检测 | 第71-78页 |
| 摘要 | 第71-72页 |
| ·材料 | 第72页 |
| ·实验动物 | 第72页 |
| ·试剂 | 第72页 |
| ·主要仪器 | 第72页 |
| ·方法 | 第72-75页 |
| ·CpG岛扩增引物的设计 | 第72-73页 |
| ·绵羊、山羊各组织基因组DNA提取 | 第73页 |
| ·基因组DNA提取和亚硫酸氢盐转化 | 第73页 |
| ·绵羊、山羊启动子区甲基化非甲基化区扩增 | 第73-74页 |
| ·扩增基因序列测定 | 第74页 |
| ·基因序列分析 | 第74页 |
| ·绵羊、山羊各组织病毒启动子甲基化检测 | 第74-75页 |
| ·结果 | 第75-76页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第75页 |
| ·扩增片段测序结果分析 | 第75-76页 |
| ·组织中病毒启动子甲基化和非甲基化检测 | 第76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| 6 实验五 enJSRV Env蛋白多克隆抗体的制备 | 第78-85页 |
| 摘要 | 第78-79页 |
| ·材料 | 第79页 |
| ·质粒 | 第79页 |
| ·试剂 | 第79页 |
| ·主要仪器设备 | 第79页 |
| ·方法 | 第79-81页 |
| ·融合蛋白的表达 | 第79页 |
| ·菌体总蛋白提取 | 第79-80页 |
| ·融合蛋白纯化 | 第80页 |
| ·重组蛋白的Western Blot鉴定 | 第80页 |
| ·免疫兔 | 第80-81页 |
| ·多抗特异性检测 | 第81页 |
| ·结果 | 第81-83页 |
| ·洗脱方法选择 | 第81-82页 |
| ·蛋白的纯化 | 第82页 |
| ·原核表达产物Western Blot检测 | 第82-83页 |
| ·多克隆抗体Western Blot检测 | 第83页 |
| ·讨论 | 第83-85页 |
| 7 实验六 内源性绵羊肺腺瘤病毒基因真核表达载体的构建 | 第85-93页 |
| 摘要 | 第85页 |
| ·材料 | 第85页 |
| ·方法 | 第85-88页 |
| ·引物设计 | 第85-86页 |
| ·pro、env基因序列扩增 | 第86页 |
| ·pro、env基因序列测定 | 第86页 |
| ·含pro、env基因真核表达质粒的构建 | 第86-87页 |
| ·在小鼠中的表达的检测 | 第87-88页 |
| ·结果 | 第88-91页 |
| ·扩增片段 | 第88页 |
| ·酶切鉴定 | 第88-89页 |
| ·测序鉴定 | 第89页 |
| ·质粒EGFP-enpro、pcDNA3.1-enenv在真核细胞中的瞬时表达 | 第89-91页 |
| ·讨论 | 第91-93页 |
| 8 总体结论 | 第93-94页 |
| 9 创新点及研究展望 | 第94-95页 |
| ·论文创新点 | 第94页 |
| ·研究展望 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-108页 |
| 附录 | 第108-110页 |
| 作者简介 | 第110页 |
