| 符号说明 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-17页 |
| ·热激蛋白的分类与生物学特性 | 第12-14页 |
| ·HSP90 家族的生物学特性 | 第12-13页 |
| ·HSP70 家族的生物学特性 | 第13-14页 |
| ·HSP60 家族的生物学特性 | 第14页 |
| ·sHSP 家族的生物学特性 | 第14页 |
| ·sHSPs 的结构和功能 | 第14-16页 |
| ·sHSPs 的研究进展 | 第16-17页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-33页 |
| ·实验材料 | 第17-20页 |
| ·动物材料 | 第17-18页 |
| ·动物材料的处理 | 第18页 |
| ·菌株与质粒 | 第18页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第18页 |
| ·PCR 引物 | 第18-20页 |
| ·实验方法 | 第20-33页 |
| ·蜜蜂总 RNA 的提取及检测 | 第20-21页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第21-27页 |
| ·蜜蜂总基因组 DNA 的提取及纯化 | 第27-28页 |
| ·AccHsp27.6 基因组 DNA 的克隆 | 第28页 |
| ·AccHsp27.65'空白区域的克隆 | 第28-29页 |
| ·5'空白区域转录因子结合位点预测 | 第29页 |
| ·生物信息学分析和系统进化分析 | 第29页 |
| ·半定量 RT-PCR 进行转录水平表达分析 | 第29-30页 |
| ·中华蜜蜂室内人工饲养实验与微生物侵染幼虫实验 | 第30页 |
| ·表达质粒构建，重组蛋白表达与纯化 | 第30-33页 |
| ·重组蛋白的体外分子伴侣活性和抗菌活性检测 | 第33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-49页 |
| ·中华蜜蜂 AccHsp27.6 基因的克隆 | 第33-37页 |
| ·总 RNA 提取 | 第33-34页 |
| ·AccHsp27.6 基因中间片段的克隆 | 第34-36页 |
| ·AccHsp27.6 基因 3'片段的克隆 | 第36页 |
| ·AccHsp27.65'片段的克隆 | 第36页 |
| ·AccHsp27.6 全长 cDNA 的克隆 | 第36-37页 |
| ·AccHsp27.6 基因基因组 DNA 的克隆 | 第37页 |
| ·AccHsp27.6 基因序列分析 | 第37-40页 |
| ·AccHsp27.6 cDNA 全长序列分析 | 第37页 |
| ·氨基酸序列分析及蛋白质结构分析 | 第37-39页 |
| ·AccHsp27.6 基因 5'空白区域的克隆与转录因子结合位点的预测 | 第39-40页 |
| ·系统进化分析 | 第40-41页 |
| ·AccHsp27.6 基因的发育表达模式和组织特异性表达模式 | 第41-42页 |
| ·AccHsp27.6 基因在非生物条件刺激下的表达模式 | 第42-44页 |
| ·中华蜜蜂室内人工培养与微生物侵染幼虫实验 | 第44-46页 |
| ·重组蛋白 AccHsp27.6 的表达与活性检测 | 第46-49页 |
| ·重组蛋白 AccHsp27.6 的表达 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白 AccHsp27.6 体外分子伴侣活性的检测 | 第47页 |
| ·重组蛋白 AccHsp27.6 体外抗菌活性 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| ·AccHsp27.6 是 sHSP 家族成员 | 第49-50页 |
| ·AccHsp27.6 序列中包含 sHSP 家族保守结构域 | 第50页 |
| ·AccHsp27.6 氨基酸序列与已鉴定的 sHSP 基因具有较高同源性 | 第50页 |
| ·AccHsp27.6 具有典型的 sHSP 家族的二级结构和三级结构 | 第50页 |
| ·AccHsp27.6 在中华蜜蜂响应环境刺激的反应中起保护作用 | 第50-51页 |
| ·AccHsp27.6 基因存在 HSEs | 第50页 |
| ·AccHsp27.6 基因在转录水平上响应各种环境刺激 | 第50-51页 |
| ·AccHsp27.6 重组蛋白具有显著的体外分子伴侣活性 | 第51页 |
| ·AccHsp27.6 在中华蜜蜂免疫防御机制中具有潜在的功能 | 第51-52页 |
| ·AccHsp27.6 基因存在核细胞因子-κB 结合位点 | 第51页 |
| ·AccHsp27.6 基因在转录水平上响应微生物侵染 | 第51-52页 |
| ·AccHsp27.6 重组蛋白具有显著体外抗菌活性 | 第52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 附录 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第60页 |
| 奖励情况 | 第60-61页 |
| 基金资助 | 第61页 |
