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拟南芥microRNA启动子甲基化的分析以及AtWRKY30转录因子的生物学功能研究

中文摘要第1-11页
Abstract第11-13页
1 前言第13-45页
   ·拟南芥 microRNA 启动子甲基化分析第13-30页
     ·表观遗传学的产生和发展第13-14页
     ·DNA 甲基化第14-25页
       ·DNA 甲基化机制第14-17页
       ·RNA 介导的 DNA 甲基化第17-18页
       ·DNA 去甲基化第18-19页
       ·DNA 甲基化与组蛋白修饰第19-20页
       ·DNA 甲基化的生物学作用第20-25页
     ·miRNA 研究进展第25-29页
       ·miRNA 合成和作用机制第25-27页
       ·miRNA 的特征第27页
       ·miRNA 自身产生和作用途径的调控第27-28页
       ·miRNA 生物学功能第28-29页
     ·DNA 甲基化与 miRNA 研究进展第29-30页
   ·拟南芥 AtWRKY30 转录因子生物学功能研究第30-43页
     ·WRKY 转录因子研究进展第30-34页
       ·WRKY 转录因子的起源和结构特点第30-32页
       ·WRKY 转录因子的调控功能第32-34页
     ·盐胁迫第34-37页
       ·SOS 信号途径第35页
       ·MAPK 信号途径第35-36页
       ·Ca2+依赖的 ABA 信号转导途径第36-37页
     ·ABA 代谢过程、信号传导及生理效应第37-39页
       ·ABA 的生物合成及分解代谢第37-38页
       ·ABA 的信号传导第38-39页
       ·ABA 的生理效应第39页
     ·茉莉酸类物质的生物合成途径、调控机理及生理效应第39-43页
       ·茉莉酸类物质的生物合成途径第40-42页
       ·茉莉酸类化合物的调控机理第42-43页
       ·茉莉酸类化合物的生理效应第43页
   ·本实验的研究目的和意义第43-45页
2 材料与方法第45-59页
   ·实验材料第45-47页
     ·植物材料第45页
     ·菌株与质粒第45页
     ·酶与各种生化试剂第45页
     ·引物第45-47页
   ·实验方法第47-59页
     ·植物基因组的提取与纯化第47页
       ·植物基因组的提取第47页
       ·植物基因组的纯化第47页
     ·重亚硫酸盐测序法第47-48页
     ·载体构建第48-51页
       ·引物设计第48-49页
       ·PCR 扩增第49页
       ·Msp-DNA methylation PCR 扩增第49-50页
       ·连接反应第50页
       ·酶切和回收第50-51页
       ·超表达 AtWRKY30 表达载体的构建第51页
       ·启动子驱动 GUS 报告基因表达载体的构建第51页
       ·RNAi 载体的构建第51页
       ·PCR 鉴定突变体纯合植株第51页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第51-52页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备第51-52页
       ·大肠杆菌细胞的转化第52页
     ·大肠杆菌中质粒的提取第52-53页
       ·大量法提质粒第52-53页
       ·小量法提质粒第53页
     ·农杆菌感受态细胞的制备和转化第53-54页
       ·根癌农杆菌 GV3101 感受态细胞的制备第53页
       ·冻融法转化农杆菌细胞第53-54页
     ·拟南芥的转化及转基因拟南芥的鉴定第54页
       ·拟南芥的转化第54页
       ·转基因拟南芥的鉴定第54页
     ·RNA 的提取纯化与反转录第54-55页
       ·TRIZOL 法提取 RNA第54页
       ·RNA 的纯化第54-55页
       ·RNA 中基因组 DNA 的去除第55页
       ·RNA 的反转录第55页
     ·实时定量 PCR第55-56页
     ·GUS 活性测定第56-57页
     ·转基因植物 GUS 组织化学染色分析第57-59页
3 结果与分析第59-77页
   ·拟南芥 miRNA 启动子甲基化分析第59-68页
     ·拟南芥 miRNA 启动子区域甲基化统计分析第59-61页
     ·重亚硫酸盐测序法对 miRNA 启动子区域甲基化分析第61-63页
     ·拟南芥 miRNA396a 启动子区域甲基化调控自身表达第63-66页
     ·拟南芥 miRNA396a 启动子甲基化与非生物胁迫第66-68页
   ·拟南芥 AtWRKY30 转录因子生物学功能研究第68-77页
     ·拟南芥 AtWRKY30 不同生长发育时期的表达模式分析第68页
     ·拟南芥 AtWRKY30 在盐胁迫下的表达模式分析第68-70页
     ·拟南芥 AtWRKY30 调节对盐胁迫的耐性第70-72页
     ·拟南芥 AtWRKY30 参与了植物激素类信号途径第72-73页
     ·拟南芥 AtWRKY30 调节拟南芥对胁迫耐性的机理分析第73-75页
     ·拟南芥 AtWRKY30 启动子元件分析第75-77页
4 讨论第77-81页
5 结论第81-83页
参考文献第83-97页
附录第97-100页
致谢第100页

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