| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-22页 |
| 符号说明 | 第22-23页 |
| 本文关键基因功能简介 | 第23-24页 |
| 第一章 前言 | 第24-62页 |
| ·酵母中Leioir途径的酶 | 第27-30页 |
| ·Gal1-半乳糖激酶 | 第27-28页 |
| ·Gal7-转移酶 | 第28-29页 |
| ·Gal10-变旋酶,差向异构酶 | 第29页 |
| ·Leior途径中的酶缺陷与半乳糖耐血症 | 第29-30页 |
| ·半乳糖基因表达调控 | 第30-41页 |
| ·酵母半乳糖基因和调控蛋白 | 第30-31页 |
| ·控制半乳糖基因表达的开关元件 | 第31-38页 |
| ·开关元件中蛋白之间的相互作用 | 第38-39页 |
| ·GAL基因表达调控的机制 | 第39-41页 |
| ·GAL基因表达的记忆性 | 第41-44页 |
| ·GAL基因的重新定位 | 第41-42页 |
| ·GAL基因的转录记忆 | 第42-44页 |
| ·酵母转录激活因子Gal4的降解与半乳糖代谢调控 | 第44-48页 |
| ·泛素-蛋白酶体途径 | 第44-45页 |
| ·转录激活因子Gal4的磷酸化修饰与泛素化 | 第45-46页 |
| ·转录激活因子Gal4的两种降解方式与转录调控 | 第46-48页 |
| ·线粒体的功能与半乳糖代谢 | 第48-52页 |
| ·酵母RNA聚合酶的修饰Ⅱ与转录 | 第52-56页 |
| ·真核生物基因的转录及转录后加工 | 第52-54页 |
| ·RNA聚合酶C末端的磷酸化与转录 | 第54-56页 |
| ·论文的研究意义及主要内容 | 第56-62页 |
| 第二章 Gal4-Gal80间相互作用关系影响Dsg1对半乳糖代谢调控 | 第62-87页 |
| ·引言 | 第62页 |
| ·材料与方法 | 第62-76页 |
| ·酵母菌株、质粒、培养基及培养条件 | 第62-65页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第65-66页 |
| ·菌种的保存 | 第66页 |
| ·PCR反应 | 第66页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳、PCR产物纯化、质粒提取及凝胶回收 | 第66-67页 |
| ·酿酒酵母完整细胞转化法 | 第67-68页 |
| ·酵母染色体的提取 | 第68页 |
| ·基因敲除 | 第68-69页 |
| ·报告基因活性的测定(β-半乳糖苷酶酶活测定) | 第69-70页 |
| ·酵母双杂交 | 第70页 |
| ·染色体免疫共沉淀 | 第70-72页 |
| ·蛋白异源表达与纯化 | 第72-73页 |
| ·体外pull-down | 第73页 |
| ·Western blot(免疫印迹杂交) | 第73-76页 |
| ·结果与讨论 | 第76-86页 |
| ·Gal4突变体以及DSG1,GAL80,URA3基因敲除菌的构建 | 第76-78页 |
| ·Gal4磷酸化不影响Dsg1对GAL基因的调控 | 第78-79页 |
| ·Gal4的泛素化状态不受Dsg1的影响 | 第79-81页 |
| ·DSG1影响GAL基因早期诱导表达 | 第81-83页 |
| ·DSG1不影响Gal4与启动子结合 | 第83-84页 |
| ·DSG1基因缺失在半乳糖为碳源时呈现慢生长表型 | 第84页 |
| ·Gal4与Gal80间相互作用减弱能够互补DSG1导致的半乳糖基因转录缺陷 | 第84-86页 |
| ·本章小结 | 第86-87页 |
| 第三章 酵母细胞胞内能量状态与半乳糖代谢基因的转录表达 | 第87-98页 |
| ·引言 | 第87页 |
| ·材料与方法 | 第87-93页 |
| ·酵母菌株、培养基及培养条件 | 第87-90页 |
| ·酵母mRNA提取 | 第90-91页 |
| ·反转录反应 | 第91-92页 |
| ·定量PCR反应 | 第92页 |
| ·酵母胞内ATP浓度和NAD(H)/NADP(H)浓度的测定 | 第92-93页 |
| ·实验结果与讨论 | 第93-97页 |
| ·胞内能量短缺的突变型菌株影响报告基因活性 | 第93-95页 |
| ·胞内能量短缺的突变型菌株影响GAL基因转录 | 第95-96页 |
| ·胞内能量短缺的突变型菌株影响RNA聚合酶在启动子上的占据 | 第96-97页 |
| ·本章小结 | 第97-98页 |
| 第四章 酵母细胞内NADP(H)水平与半乳糖代谢基因的转录表达 | 第98-112页 |
| ·引言 | 第98-99页 |
| ·材料与方法 | 第99-103页 |
| ·酵母菌株培养及以及遗传操作 | 第99-102页 |
| ·主要试剂以及仪器 | 第102页 |
| ·操作方法 | 第102-103页 |
| ·结果与讨论 | 第103-109页 |
| ·胞内NADP(H)短缺的突变型菌株对H2O2更敏感 | 第103-105页 |
| ·胞内NADP(H)短缺的突变型菌株影响报告基因活性 | 第105-106页 |
| ·胞内NADP(H)短缺的突变型菌株影响GAL基因转录 | 第106-107页 |
| ·胞内NADP(H)短缺的突变菌型株影响RNA聚合酶在启动子上的占据 | 第107页 |
| ·组成型基因在ATP和NAD(H)/NADP(H)途径基因缺失菌株中的表达不受影响 | 第107-109页 |
| ·本章小结 | 第109-112页 |
| 第五章 Gal80-Gal4相互作用改变影响胞内能量及NADP(H)短缺菌株中的GAL基因转录表达 | 第112-126页 |
| ·引言 | 第112页 |
| ·材料与方法 | 第112-116页 |
| ·酵母菌株培养以及遗传操作 | 第112-116页 |
| ·主要试剂以及仪器 | 第116页 |
| ·操作方法 | 第116页 |
| ·实验结果与讨论 | 第116-124页 |
| ·野生型及基因缺失菌株中Gal3和Gal80表达水平不受影响 | 第116-118页 |
| ·Gal80-Gal4相互作用变化影响胞内能量短缺菌株对GAL基因的调控 | 第118-121页 |
| ·Gal80-Gal4相互作用变化影响胞内NADP(H)短缺菌株对GAL基因的调控 | 第121-124页 |
| ·本章小结 | 第124-126页 |
| 第六章 Gal3(ATP)与NADP(H)调节Gal4与Gal80间相互作用 | 第126-141页 |
| ·引言 | 第126页 |
| ·材料与方法 | 第126-131页 |
| ·酵母菌株、培养基及培养条件 | 第126-129页 |
| ·主要试剂以及仪器 | 第129-130页 |
| ·蛋白的表达与纯化 | 第130页 |
| ·体外蛋白相互作用体系 | 第130-131页 |
| ·结果与讨论 | 第131-140页 |
| ·体外ATP,galactose和Gal3对Gal4-Gal80-DNA复合物中Gal80具有去稳定作用 | 第131页 |
| ·NADP(H)对Gal4-Gal80-DNA复合物中Gal80具有去稳定作用 | 第131-133页 |
| ·Gal3和NADP(H)协同去稳定Gal4-Gal80-DNA复合物中的Gal80 | 第133-136页 |
| ·胞内能量及NADP(H)水平改变Gal4-Gal80相互作用 | 第136-138页 |
| ·Dsg1调节Gal4-Gal80间相互作用 | 第138-140页 |
| ·本章小结 | 第140-141页 |
| 全文总结 | 第141-143页 |
| 参考文献 | 第143-156页 |
| 致谢 | 第156-157页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第157-158页 |
| 外文写作一 | 第158-177页 |
