| 图片目录 | 第1-12页 |
| 表格目录 | 第12-14页 |
| 中文摘要 | 第14-17页 |
| 英文摘要 | 第17-21页 |
| 缩写词表 | 第21-22页 |
| 前言 | 第22-25页 |
| 第一章 文献综述 | 第25-66页 |
| 禾本科牧草的组培再生体系及转基因技术的研究进展 | 第25-50页 |
| 1.禾本科牧草的组培再生 | 第25-32页 |
| ·愈伤组织的形态发生方式 | 第25-29页 |
| ·不定芽方式 | 第25-26页 |
| ·胚状体方式 | 第26-29页 |
| ·影响禾本科牧草再生的因素 | 第29-32页 |
| ·植物激素对牧草愈伤组织诱导的影响 | 第29-31页 |
| ·植物激素对牧草愈伤组织分化的影晌 | 第31页 |
| ·受体材料和外植体来源对牧草愈伤组织再生的影响 | 第31-32页 |
| ·继代培养时间对牧草愈伤组织分化能力的影晌 | 第32页 |
| ·其他因素对牧草愈伤组织诱导和再生的影响 | 第32页 |
| 2.禾本科牧草的遗传转化 | 第32-50页 |
| ·禾本科牧草遗传转化的方法 | 第33-41页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化 | 第33-35页 |
| ·通过原生质体的遗传转化 | 第35页 |
| ·脂质体介导转化法 | 第35-36页 |
| ·电击穿孔转化法 | 第36-37页 |
| ·PEG介导转化法 | 第37-38页 |
| ·农杆菌共培养转化法 | 第38-39页 |
| ·基因直接转入组织细胞 | 第39-41页 |
| ·影响禾本科牧草的遗传转化的因素 | 第41-44页 |
| ·农杆菌菌株 | 第42页 |
| ·乙酰丁香酮 | 第42-43页 |
| ·单糖 | 第43页 |
| ·甜菜碱 | 第43页 |
| ·钙离子 | 第43-44页 |
| ·共培养时间 | 第44页 |
| ·渗透处理 | 第44页 |
| ·外植体的类型和生理状态 | 第44页 |
| ·外植体的预培养 | 第44页 |
| ·转化细胞的选择培养和高频再生 | 第44-46页 |
| ·转化细胞的选择 | 第45页 |
| ·高效转化体再生 | 第45-46页 |
| ·转基因表达和转基因沉默 | 第46-50页 |
| ·外源基因整合和表达 | 第46页 |
| ·转基因沉默 | 第46-48页 |
| ·消除转基因沉默的方法 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-66页 |
| 第二章 类产碱假单胞菌杀虫蛋白基因在大肠杆菌中的表达和鉴定 | 第66-83页 |
| 摘要 | 第66页 |
| 引言 | 第66-67页 |
| 1.材料与方法 | 第67-76页 |
| ·实验材料 | 第67-71页 |
| ·菌株和质粒 | 第68页 |
| ·仪器和设备 | 第68-69页 |
| ·试剂盒及购买的试剂 | 第69页 |
| ·自配的主要试剂和培养基 | 第69-70页 |
| ·引物序列 | 第70-71页 |
| ·方法 | 第71-76页 |
| ·类产碱假单胞菌总DNA提取 | 第71页 |
| ·质粒大批量提取 | 第71-72页 |
| ·质粒小批量提取 | 第72页 |
| ·引物设计 | 第72-73页 |
| ·PCR克隆 | 第73页 |
| ·PCR产物连接到pMD18—T载体 | 第73页 |
| ·大肠杆菌高频转化法 | 第73-74页 |
| ·大肠杆菌氯化钙转化法 | 第74页 |
| ·重组质粒的酶切和目标片段的回收 | 第74-75页 |
| ·基因工程质粒的构建 | 第75页 |
| ·DNA测序 | 第75页 |
| ·DNA序列分析 | 第75页 |
| ·ppip基因的表达及其杀虫蛋白的检测 | 第75-76页 |
| ·室内的蝗虫喂饲实验 | 第76页 |
| 2.结果 | 第76-80页 |
| ·杀虫蛋白基因的序列测定及分析 | 第76-78页 |
| ·pLQZ、pppip、pLppip和pLTppip载体的构建 | 第78页 |
| ·表达产物的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第78-79页 |
| ·室内的蝗虫喂饲实验 | 第79-80页 |
| 3.讨论 | 第80-81页 |
| 小结 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-83页 |
| 第三章 ppip基因植物表达载体的构建和在烟草中表达的研究 | 第83-106页 |
| 摘要 | 第83页 |
| 引言 | 第83-84页 |
| 1.材料和方法 | 第84-96页 |
| ·材料 | 第84-86页 |
| ·菌株和质粒 | 第84-85页 |
| ·植物材料 | 第85页 |
| ·仪器和设备 | 第85页 |
| ·试剂盒和购买的试剂 | 第85页 |
| ·自配的主要试剂 | 第85页 |
| ·植物培养基 | 第85-86页 |
| ·引物序列 | 第86页 |
| ·方法 | 第86-96页 |
| ·表达载体pCppip的构建 | 第86-88页 |
| ·重组载体转化大肠杆菌 | 第88页 |
| ·目的基因的植物表达载体转化根癌农杆菌 | 第88-89页 |
| ·农杆菌介导的植物表达载体pCppip叶盘法转化烟草 | 第89-91页 |
| ·再生植株的PCR检测 | 第91-93页 |
| ·转基因植株的Southern杂交分析 | 第93-96页 |
| ·室内的蝗虫喂饲实验 | 第96页 |
| 2.结果 | 第96-102页 |
| ·目的基因植物表达载体pCppip的构建 | 第96-97页 |
| ·ppip基因转化烟草的结果 | 第97-100页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第97页 |
| ·诱导丛生芽 | 第97-98页 |
| ·诱导生根 | 第98页 |
| ·移栽 | 第98页 |
| ·再生植株的PCR检测 | 第98页 |
| ·Southern杂交 | 第98-100页 |
| ·转基因植株的抗虫性实验 | 第100-102页 |
| 3、讨论 | 第102-103页 |
| 小结 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-106页 |
| 第四章 农杆菌介导的川草二号老芒麦高效转基因体系的建立 | 第106-151页 |
| 摘要 | 第106页 |
| 引言 | 第106-108页 |
| 1. 材料及方法 | 第108-121页 |
| ·材料 | 第108-111页 |
| ·外植体 | 第108页 |
| ·仪器和设备 | 第108页 |
| ·菌株、质粒和工具酶 | 第108页 |
| ·自配的主要标准试剂 | 第108-109页 |
| ·自配的其它试剂 | 第109页 |
| ·培养基 | 第109-111页 |
| ·方法 | 第111-121页 |
| ·川草二号老芒麦愈伤组织再生体系的建立 | 第111-113页 |
| ·根癌农杆菌介导川草二号老芒麦愈伤组织遗传转化体系的建立 | 第113-117页 |
| ·转化植物的分子检测 | 第117-121页 |
| 2 结果 | 第121-139页 |
| ·川草二号老芒麦愈伤组织再生体系的建立 | 第121-128页 |
| ·不同基本培养基和外植体材料对老芒麦愈伤组织诱导频率的影响 | 第121-122页 |
| ·NAA,6-BA,KT,ABA,CH等植物生长调节物质对老芒麦愈伤组织诱导的影响 | 第122-123页 |
| ·不同植物生长调节剂组合对以川草二号老芒麦成熟胚为外植体的愈伤组织诱导频率的影响 | 第123-124页 |
| ·光照对老芒麦愈伤组织诱导频率的影响 | 第124-125页 |
| ·不同培养基对不同老芒麦品种愈伤组织分化频率的影响 | 第125-126页 |
| ·不同继代培养时间对愈伤组织分化能力的影响 | 第126-127页 |
| ·不同的植物生长调节剂组合对川草二号老芒麦愈伤组织分化的影响 | 第127-128页 |
| ·川草二号老芒麦愈伤组织再生图片 | 第128页 |
| ·类产碱假单胞菌杀虫蛋白基因转化载体的构建 | 第128-130页 |
| ·程序化转基因体系的建立 | 第130-133页 |
| ·潮霉素(Hn)有效筛选浓度的试验 | 第130页 |
| ·愈伤组织继代时间与农杆菌侵染 | 第130-131页 |
| ·共培养温度与农杆菌侵染 | 第131页 |
| ·不同培养培养基与农杆菌侵染 | 第131-132页 |
| ·农杆菌处理菌液浓度与其侵染 | 第132-133页 |
| ·转化植物的分子检测 | 第133-139页 |
| ·转化植株的DNA抽提 | 第133页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第133-134页 |
| ·转基因植株Southern杂交分析 | 第134页 |
| ·转基因植株的RT-PCR分析 | 第134-137页 |
| ·转基因植株的抗虫性实验 | 第137页 |
| ·农杆菌介导的川草二号老芒麦转基因操作体系及体系效率的验证 | 第137-139页 |
| ·转基因川草二号老芒麦的再生图 | 第139页 |
| 3、讨论 | 第139-145页 |
| ·川革二号老芒麦愈伤组织再生体系 | 第139-142页 |
| ·禾本科牧草的遗传转化 | 第142-145页 |
| 小结 | 第145页 |
| 参考文献 | 第145-151页 |
| 第五章 根癌农杆菌介导ppip基因转化短芒披碱草的研究 | 第151-169页 |
| 摘要 | 第151页 |
| 引言 | 第151-152页 |
| 1.材料和方法 | 第152-154页 |
| ·材料 | 第152-154页 |
| ·外植体 | 第152页 |
| ·仪器和设备 | 第152页 |
| ·菌株、质粒和工具酶 | 第152-153页 |
| ·自配的主要标准试剂 | 第153页 |
| ·自配的其它试剂 | 第153页 |
| ·培养基 | 第153-154页 |
| ·方法 | 第154页 |
| ·短芒披碱草愈伤组织再生体系的建立 | 第154页 |
| ·根癌农杆菌介导的短芒披碱草愈伤组织遗传转化体系的建立 | 第154页 |
| ·转化植物的分子检测 | 第154页 |
| ·室内的蝗虫喂饲实验 | 第154页 |
| 2 结果 | 第154-166页 |
| ·短芒披碱草愈伤组织再生体系 | 第154-160页 |
| ·诱导愈伤组织的基本培养基和外植体的筛选 | 第154-155页 |
| ·植物生长调节剂及其组合对愈伤组织诱导的影响 | 第155-157页 |
| ·不同培养基和继代时间对愈伤组织分化的影响 | 第157-158页 |
| ·植物生长调节剂组合及浓度对短芒披碱草愈伤组织分化的影响 | 第158页 |
| ·短芒披碱草愈伤组织再生体系 | 第158-160页 |
| ·类产碱假单胞菌杀虫蛋白基因转化载体的构建 | 第160页 |
| ·程序化转基因体系的建立 | 第160-161页 |
| ·转化植物的分子检测 | 第161-163页 |
| ·转化植株的DNA抽提 | 第161页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第161-162页 |
| ·转基因植株Southern杂交分析 | 第162页 |
| ·转基因植株的RT-PCR分析 | 第162-163页 |
| ·转基因植株的抗虫性实验 | 第163页 |
| ·农杆菌介导的短芒披碱草转基因操作体系及体系效率的验证 | 第163-165页 |
| ·转基因短芒披碱草的再生图片 | 第165-166页 |
| 小结 | 第166页 |
| 参考文献 | 第166-169页 |
| 结论 | 第169-172页 |
| 在校期间发表文章情况 | 第172-175页 |
| 致谢 | 第175-177页 |
