| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-18页 |
| ·甾体化合物及甾体药物 | 第9-10页 |
| ·甾体化合物的微生物转化 | 第10-12页 |
| ·3-酮基甾体-1(2)位脱氢反应的研究进展 | 第12-15页 |
| ·3-酮基甾体-1(2)位的脱氢机理 | 第12-14页 |
| ·3-酮基甾体-1(2)脱氢酶的氨基酸序列对比 | 第14页 |
| ·3-酮基甾体-1(2)脱氢酶的异源表达 | 第14-15页 |
| ·本课题的研究目的与内容 | 第15-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-28页 |
| ·材料 | 第18-23页 |
| ·培养基 | 第18页 |
| ·菌株培养条件 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-20页 |
| ·菌株和质粒 | 第20-21页 |
| ·引物序列 | 第21-22页 |
| ·实验主要仪器 | 第22-23页 |
| ·方法 | 第23-28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第23页 |
| ·细菌总DNA的抽提 | 第23-24页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第24页 |
| ·DNA连接反应 | 第24页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第24页 |
| ·细菌质粒DNA的抽提 | 第24页 |
| ·DNA的保存 | 第24页 |
| ·PCR扩增反应 | 第24-25页 |
| ·Genome-Walking克隆基因基本步骤 | 第25-26页 |
| ·分枝杆菌基因组的提取 | 第26页 |
| ·外源基因在大肠杆菌E.coliDH5α中的诱导表达 | 第26页 |
| ·SDS-PAGE检测表达蛋白 | 第26-27页 |
| ·一位脱氢酶酶活单位定义及酶学性质分析 | 第27页 |
| ·外源基因在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/plysS中的诱导表达 | 第27-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-49页 |
| ·简单节杆菌一位脱氢酶基因 | 第28-32页 |
| ·简单节杆菌基因组的提取 | 第28页 |
| ·简单节杆菌3-酮基甾体-1(2)脱氢酶基因的PCR,克隆 | 第28-29页 |
| ·分枝杆菌一位脱氢酶PCR扩增、克隆以及序列分析 | 第29-32页 |
| ·分枝杆菌一位脱氢酶全片段的获得 | 第32-40页 |
| ·分枝杆菌基因组提取方法改进 | 第32-33页 |
| ·分枝杆菌3-酮基甾体-1(2)脱氢酶全序列的获得 | 第33-36页 |
| ·全长Mycobacterium sp.3-酮基甾体-1(2)脱氢酶基因的克隆 | 第36-40页 |
| ·Mycobacterium sp.3-酮基甾体-1(2)脱氢酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第40-48页 |
| ·大肠杆菌表达载体pHZ1272的构建 | 第40-41页 |
| ·由pET-22构建表达载体 | 第41-42页 |
| ·3-酮基甾体-1(2)脱氢酶基因在E coli BL21(DE3)/plysS中的表达 | 第42-43页 |
| ·E.coliBL21(DE3)/plysS中甾体一位脱氢酶的酶活测定 | 第43-44页 |
| ·由pUC18构建表达载体 | 第44-46页 |
| ·3-酮基甾体-1(2)脱氢酶基因在E coli DH5α中的表达 | 第46-47页 |
| ·E coli DH5α中甾体一位脱氢酶的酶活测定 | 第47-48页 |
| 小结 | 第48-49页 |
| 第四章 结论与展望 | 第49-51页 |
| ·结论 | 第49-50页 |
| ·简单节杆菌KSDD的PCR与分枝杆菌脱氢酶保守区的PCR | 第49页 |
| ·Mycobacterium sp.染色体的走读 | 第49页 |
| ·简单节杆菌与分枝杆菌KSDD在E.COliDH5α表达 | 第49-50页 |
| ·展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 附录 | 第56-58页 |
