| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-20页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌中酶的研究 | 第10-12页 |
| ·膜结合脱氢酶的研究 | 第10-11页 |
| ·胞质中氧化还原酶的研究 | 第11-12页 |
| ·醛酮还原酶(AKRs)家族概述 | 第12-16页 |
| ·醛酮还原酶家族分类 | 第13-14页 |
| ·醛酮还原酶参与的反应类型 | 第14-15页 |
| ·醛酮还原酶家族结构上的共性 | 第15-16页 |
| ·蛋白质晶体的获得与晶体结构的分析 | 第16-17页 |
| ·蛋白质分子结晶原理 | 第16-17页 |
| ·蛋白质分子结晶技术 | 第17页 |
| ·影响蛋白质结晶的因素 | 第17页 |
| ·定点突变技术 | 第17-19页 |
| ·本课题的研究意义和内容 | 第19-20页 |
| 第2章 材料与方法 | 第20-30页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·菌株与质粒 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·培养基配方 | 第20页 |
| ·主要仪器及设备 | 第20-21页 |
| ·实验所用程序及软件 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-30页 |
| ·野生型蛋白质Gox0644的表达和纯化 | 第21-22页 |
| ·Gox0644晶体的获得 | 第22页 |
| ·晶体结构的获得 | 第22页 |
| ·晶体结构的建立 | 第22页 |
| ·晶体结构分析 | 第22页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第22页 |
| ·家族分类 | 第22页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌基因组的抽提 | 第22-23页 |
| ·PCR引物设计 | 第23页 |
| ·PCR反应体系 | 第23页 |
| ·常规PCR扩增 | 第23页 |
| ·质粒抽提 | 第23-24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·氨基酸定点突变 | 第24-26页 |
| ·化学转化大肠杆菌感受态细胞 | 第26页 |
| ·阳性克隆的筛选及验证 | 第26-27页 |
| ·重组质粒突变后的诱导表达 | 第27页 |
| ·粗酶液制备 | 第27页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测突变蛋白的表达 | 第27-28页 |
| ·突变蛋白浓度测定 | 第28-29页 |
| ·突变蛋白活性测试 | 第29-30页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第30-57页 |
| ·Gox0644在醛酮还原酶超家族中的分类 | 第30-31页 |
| ·Gox0644蛋白质晶体结构分析 | 第31-34页 |
| ·整体结构概述 | 第32页 |
| ·辅酶结合 | 第32-33页 |
| ·底物结合 | 第33-34页 |
| ·Gox0644与Gox1615的比较 | 第34-39页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第35页 |
| ·酶学性质差异 | 第35-37页 |
| ·晶体结构比较 | 第37-39页 |
| ·突变位点的设计与定点突变 | 第39-46页 |
| ·突变基因的获得 | 第40-41页 |
| ·突变基因的测序验证 | 第41-46页 |
| ·突变基因在大肠杆菌BL21中的表达 | 第46-50页 |
| ·与催化四联体相关的突变体蛋白表达 | 第46-48页 |
| ·与辅酶或底物结合位点相关突变体的蛋白表达 | 第48-49页 |
| ·突变体对目的蛋白可溶性表达的影响 | 第49-50页 |
| ·突变体的酶活测定分析 | 第50-57页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第50页 |
| ·与催化四联体相关的突变体酶活分析 | 第50-53页 |
| ·与辅酶结合位点相关的突变体酶活分析 | 第53页 |
| ·与底物结合位点相关的突变体酶活分析 | 第53-55页 |
| ·R192G、D53A突变体的酮还原活性分析 | 第55-57页 |
| 第4章 结论与展望 | 第57-58页 |
| ·结论 | 第57页 |
| ·展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63页 |