| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-21页 |
| ·棒状链霉菌(Streptomyces clavuligerus)及其次级代谢产物 | 第12-19页 |
| ·概述 | 第12页 |
| ·克拉维酸 | 第12-17页 |
| ·头霉素C | 第17-19页 |
| ·立题依据 | 第19-21页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第21-31页 |
| ·实验材料 | 第21-24页 |
| ·菌种与质粒 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·试剂 | 第22-23页 |
| ·溶液 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-31页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA小量提取(碱变性法) | 第24-25页 |
| ·链霉菌总DNA的提取 | 第25页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备和DNA转化 | 第25-26页 |
| ·DNA酶切和连接 | 第26页 |
| ·DNA电泳和凝胶片段回收 | 第26-27页 |
| ·PCR扩增片段 | 第27-28页 |
| ·接合转移实验及双交换菌株的筛选 | 第28-29页 |
| ·基因阻断菌株产物的提取及检测 | 第29-31页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第31-56页 |
| 第一部分 棒状链霉菌pyc基因的插入失活 | 第31-39页 |
| ·pyc基因片段的获得 | 第31页 |
| ·质粒pBH14的构建 | 第31-34页 |
| ·质粒pBH14的PCR验证 | 第34页 |
| ·接合转移实验 | 第34-35页 |
| ·双交换菌株的筛选 | 第35页 |
| ·双交换菌株的验证 | 第35-36页 |
| ·重组菌株发酵产物的HPLC分析 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第二部分 棒状链霉菌pyc基因的点突变失活 | 第39-47页 |
| ·pyc基因点突变片段的获得 | 第39-41页 |
| ·质粒pBH25的构建 | 第41-44页 |
| ·质粒pBH25的验证 | 第44页 |
| ·接合转移实验 | 第44页 |
| ·双交换菌株的筛选 | 第44页 |
| ·点突变基因阻断菌株的验证 | 第44-45页 |
| ·重组菌株发酵产物的HPLC分析 | 第45页 |
| ·点突变重组菌株的遗传稳定性分析 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| 第三部分 棒状链霉菌pyc基因的Deletion失活 | 第47-56页 |
| ·pyc基因Deletion片段的获得 | 第47-49页 |
| ·质粒pBH35的构建 | 第49页 |
| ·质粒pBH35的验证 | 第49-51页 |
| ·接合转移实验 | 第51-52页 |
| ·双交换菌株的筛选 | 第52页 |
| ·基因Deletion阻断菌株的验证 | 第52页 |
| ·重组菌株发酵产物的HPLC分析 | 第52-54页 |
| ·pyc基因Deletion失活重组菌株的遗传稳定性分析 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 附录 | 第60-63页 |
