| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-19页 |
| ·植物中AsA 合成的研究 | 第12-13页 |
| ·植物中AsA 代谢的研究 | 第13-14页 |
| ·植物中AsA 的转运 | 第14页 |
| ·植物AsA合成代谢关键酶研究进展 | 第14-19页 |
| ·GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GMPase) | 第14-15页 |
| ·L-半乳糖-1, 4-内酯脱氢酶(GalLDH) | 第15-18页 |
| ·脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR) | 第18-19页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-31页 |
| ·试验材料 | 第19-20页 |
| ·植物材料 | 第19页 |
| ·材料处理 | 第19页 |
| ·菌株与质粒 | 第19-20页 |
| ·酶及生化试剂 | 第20页 |
| ·PCR 引物 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-31页 |
| ·利用TRIZOL 试剂盒提取RNA | 第20-22页 |
| ·反转录cDNA 第一条链的合成 | 第22页 |
| ·目的基因的分离 | 第22-26页 |
| ·中间片段的获得 | 第22-26页 |
| ·RT-PCR 扩增目的片段 | 第22-23页 |
| ·连接反应 | 第23-24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第24页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第24-25页 |
| ·质粒DNA 的酶切鉴定 | 第25页 |
| ·序列测定 | 第25-26页 |
| ·目的基因cDNA 3′端片段的分离 | 第26页 |
| ·GalLDH 基因反义表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·回收 | 第27页 |
| ·农杆菌介导转化烟草 | 第27-29页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第27-28页 |
| ·利用农杆菌介导转化烟草 | 第28-29页 |
| ·转基因烟草植株的PCR 检测 | 第29-30页 |
| ·CTAB 法微量法提取基因组DNA | 第29页 |
| ·转基因植株的PCR 筛选 | 第29-30页 |
| ·荧光定量PCR（Real-time quantitative RT-PCR） | 第30-31页 |
| ·AsA 含量的测定 | 第31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-41页 |
| ·GalLDH 的分离及其特征 | 第31-33页 |
| ·GalLDH 中间片段的分离 | 第31-32页 |
| ·GalLDH 基因序列分析 | 第32-33页 |
| ·表达载体的构建 | 第33-35页 |
| ·基因表达特性分析 | 第35-40页 |
| ·GalLDH 基因在野生型马铃薯中的表达 | 第35-36页 |
| ·温度胁迫对光照和黑暗下马铃薯叶片GalLDH 基因的转录水平、GalLDH 活性和抗坏血酸含量的影响 | 第36-40页 |
| ·AsA 含量 | 第36-37页 |
| ·DHA 含量 | 第37-38页 |
| ·AsA+DHA | 第38页 |
| ·GalLDH 活性 | 第38-39页 |
| ·GalLDH 基因转录水平 | 第39-40页 |
| ·转反义GalLDH 基因烟草的检测 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| ·马铃薯不同器官GalLDH 基因表达 | 第41页 |
| ·光照对 GalLDH 基因表达的影响 | 第41页 |
| ·温度对GalLDH 基因表达的影响 | 第41-42页 |
| 5 结论 | 第42-43页 |
| 6 参考文献 | 第43-52页 |
| 7 致谢 | 第52页 |
