| 英文缩写符号及其中英文对照表 | 第1-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第15-28页 |
| ·RdRP 的分类 | 第15页 |
| ·RNA 病毒RdRP 的结构及功能特点 | 第15-17页 |
| ·植物中的 RdRP | 第17-26页 |
| ·植物中 RdRP 的存在 | 第17-18页 |
| ·植物中 RdRP 的结构特点 | 第18-20页 |
| ·植物中 RdRP 的功能 | 第20-26页 |
| ·RdRP 与RNA 沉默 | 第20-23页 |
| ·RdRP 与植物抗病毒防御 | 第23-26页 |
| ·本研究的目的意义 | 第26-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-53页 |
| ·实验材料 | 第28-30页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·植物材料培养与处理 | 第28页 |
| ·菌株与质粒 | 第28页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第28-29页 |
| ·PCR 引物 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-53页 |
| ·植物总RNA 的提取及检测 | 第30-32页 |
| ·利用RNeasy Plant Mini Kit 提取总RNA | 第30-31页 |
| ·利用TRIZOL试剂盒提取RNA | 第31页 |
| ·甲醛变性凝胶进行RNA电泳 | 第31-32页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第32-33页 |
| ·cDNA 回收纯化 | 第33页 |
| ·cDNA 的5′加尾反应 | 第33页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第33-36页 |
| ·兼并引物 PCR 获得 GhRdRP 中间片段 | 第34页 |
| ·5′RACE 获得5′端序列 | 第34-35页 |
| ·3′RACE 获得3′端序列 | 第35-36页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第36页 |
| ·GhRdRP 全长基因组序列的获得 | 第36-38页 |
| ·CTAB 法提取棉花基因组总 DNA | 第37页 |
| ·总DNA提取产物的纯化 | 第37-38页 |
| ·GhRdRP基因启动子的克隆 | 第38-39页 |
| ·GhRdRP基因启动子的反向PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·上游启动子序列的分析 | 第39页 |
| ·电泳目的片段的回收 | 第39-40页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第40页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第40页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第40-41页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第41-43页 |
| ·碱法小量提取质粒 DNA | 第41页 |
| ·大量提取质粒 DNA | 第41-43页 |
| ·试剂盒质粒微量提取方案 | 第43页 |
| ·对重组质粒的酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·半定量 RT-PCR 分析 | 第44页 |
| ·总RNA 的提取 | 第44页 |
| ·琼脂糖甲醛变性胶电泳 | 第44页 |
| ·反转录cDNA第一条链的合成 | 第44页 |
| ·半定量 RT-PCR 检测 | 第44页 |
| ·Southern 杂交 | 第44-47页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第44-45页 |
| ·限制性内切酶消化 | 第45页 |
| ·转膜及烘膜 | 第45-46页 |
| ·探针合成 | 第46页 |
| ·预杂交及杂交 | 第46-47页 |
| ·植物表达载体的构建与转化 | 第47-50页 |
| ·植物正义表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第48页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第48-49页 |
| ·农杆菌介导转化烟草 | 第49-50页 |
| ·原核表达及抗体制备 | 第50-53页 |
| ·实验试剂配制 | 第50页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第50页 |
| ·E.coli BL21 原核表达的诱导 | 第50-51页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第51-52页 |
| ·抗体的制备 | 第52页 |
| ·抗血清效价的测定（试管微量沉淀法） | 第52-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-75页 |
| ·棉花RNA 依赖的RNA 聚合酶基因的分离 | 第53-57页 |
| ·棉花RNA 的提取及反转录 | 第53页 |
| ·GhRdRP 中间片段的分离 | 第53-54页 |
| ·GhRdRP 5′片段的分离 | 第54-55页 |
| ·GhRdRP 3′片段的分离 | 第55-56页 |
| ·GhRdRP 全长cDNA 的分离 | 第56-57页 |
| ·GhRdRP 的序列分析 | 第57-66页 |
| ·GhRdRP 的全长cDNA 分析 | 第57-60页 |
| ·GhRdRP 编码的蛋白序列分析 | 第60-63页 |
| ·GhRdRP 基因组及启动子序列分析 | 第63-66页 |
| ·GhRdRP 在棉花基因组中的拷贝数分析 | 第66-67页 |
| ·GhRdRP 的表达特性分析 | 第67-69页 |
| ·GhRdRP 基因的原核诱导表达及抗体制备 | 第69-70页 |
| ·GhRdRP基因在转基因烟草中的表达及初步抗病分析 | 第70-75页 |
| ·转基因烟草表达载体的构建 | 第70-71页 |
| ·转基因再生植株的获得 | 第71页 |
| ·T_0 代转基因植株的鉴定 | 第71-73页 |
| ·转基因植株的 PCR 鉴定 | 第72页 |
| ·转基因植株的半定量RT-PCR分析 | 第72-73页 |
| ·T_1代转基因植株的鉴定及转基因植株的抗性分析 | 第73-75页 |
| ·T_1代转基因植株的PCR鉴定 | 第73页 |
| ·病毒抗性分析 | 第73-74页 |
| ·下一步实验计划 | 第74-75页 |
| 4 讨论 | 第75-78页 |
| ·GhRdRP 的蛋白结构特征 | 第75-76页 |
| ·GhRdRP 的诱导表达及与相应启动子序列的关系 | 第76-77页 |
| ·GhRdRP 对转基因烟草抗病性的作用 | 第77-78页 |
| 小结 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-89页 |
| 附录 | 第89-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 硕士阶段已发表论文 | 第93页 |
