| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 1 绪论 | 第11-24页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)简史 | 第11-17页 |
| ·PCR反应的建立 | 第11-12页 |
| ·聚合酶链式反应的原理及特点 | 第12-13页 |
| ·PCR扩增的实验条件及优化 | 第13-17页 |
| ·聚合酶链式反应的类型 | 第17-19页 |
| ·扩增已知序列两侧DNA的PCR | 第18页 |
| ·巢式PCR | 第18页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第18页 |
| ·致突变PCR | 第18-19页 |
| ·其他PCR技术 | 第19页 |
| ·PCR技术的应用 | 第19-21页 |
| ·PCR技术在基础研究领域的应用 | 第20页 |
| ·PCR技术在临床医学上的应用 | 第20页 |
| ·PCR技术在法医学上的应用 | 第20-21页 |
| ·DNA聚合酶的研究现状和意义 | 第21-24页 |
| ·Taq DNA聚合酶的发现 | 第21页 |
| ·耐热Taq DNA聚合酶的结构及功能特性 | 第21-22页 |
| ·其他耐热DNA聚合酶 | 第22页 |
| ·耐热DNA聚合酶研究意义 | 第22-24页 |
| 2 Taq-omni DNA聚合酶工程菌的构建 | 第24-46页 |
| ·材料与仪器 | 第24-26页 |
| ·菌株与质粒 | 第24页 |
| ·DNA聚合酶和限制性内切酶 | 第24页 |
| ·培养基及试剂 | 第24页 |
| ·实验设备 | 第24-26页 |
| ·Taq-omni DNA聚合酶工程菌的构建方法 | 第26-38页 |
| ·菌体培养及生长曲线的测定 | 第26-28页 |
| ·菌种保存方法 | 第28页 |
| ·DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·DNA的回收 | 第29-30页 |
| ·DNA片段的琼脂糖凝胶电泳 | 第30-32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第32-33页 |
| ·DNA片段的酶切 | 第33-34页 |
| ·DNA的酶连反应 | 第34-37页 |
| ·TA-克隆 | 第37-38页 |
| ·Taq-omni DNA聚合酶工程菌的构建过程 | 第38-44页 |
| ·目的基因片段的获取 | 第39-40页 |
| ·重组质粒pET29a-Sso7d的构建 | 第40页 |
| ·重组质粒pET29a-Sso7d-Taq的构建 | 第40-41页 |
| ·重组质粒pET29a-Sso7d-Taq-omni的构建 | 第41-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 3 Taq-omni DNA聚合酶的表达、提取与纯化 | 第46-55页 |
| ·酶蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第46-48页 |
| ·表达菌株的选择 | 第46页 |
| ·诱导表达原理及过程 | 第46-48页 |
| ·Taq-omni DNA聚合酶的提取 | 第48-49页 |
| ·超声波处理法 | 第48-49页 |
| ·液氮保护下的研磨法 | 第49页 |
| ·Taq-omni DNA聚合酶的纯化 | 第49-50页 |
| ·DNA聚合酶的纯化方法 | 第49页 |
| ·Ni~(2+)-NTA纯化原理 | 第49-50页 |
| ·Ni2~+-NTA纯化His-Tag重组蛋白的步骤 | 第50页 |
| ·DNA聚合酶的SDS-PAGE电泳 | 第50-55页 |
| ·SDS-PAGE电泳的原理 | 第50-51页 |
| ·蛋白电泳(SDS-PAGE)实验用液 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE实验步骤 | 第51-55页 |
| 4 Taq-omni DNA聚合酶的活性检测 | 第55-62页 |
| ·Taq-omni DNA聚合酶耐热性检测 | 第55-56页 |
| ·Taq-omni DNA聚合酶PCR反应条件的优化 | 第56-57页 |
| ·Taq-omni DNA聚合酶延伸速率实验 | 第57-58页 |
| ·Taq-omni DNA聚合酶的长片段PCR反应 | 第58页 |
| ·Taq-omni DNA聚合酶的高GC含量DNA的PCR扩增 | 第58-59页 |
| ·Taq-omni DNA聚合酶的PCR抑制剂的抵抗能力检测 | 第59-62页 |
| ·小鼠血清的PCR扩增 | 第59页 |
| ·土壤DNA的PCR扩增 | 第59-60页 |
| ·血清和土壤DNA混合物的PCR扩增 | 第60-62页 |
| 5 结论与展望 | 第62-64页 |
| ·Taq-omni DNA聚合酶的特性分析 | 第62页 |
| ·本研究的创新之处 | 第62-63页 |
| ·展望 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 附录Ⅰ | 第69-70页 |
| 附录Ⅱ | 第70-71页 |
| 附录Ⅲ | 第71-73页 |
| 附录Ⅳ | 第73-74页 |
