| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-41页 |
| ·LK研究进展 | 第10-17页 |
| ·概述 | 第10-11页 |
| ·LK的生理学特征 | 第11-12页 |
| ·LK的临床应用 | 第12-14页 |
| ·LK的作用机理 | 第14-15页 |
| ·LK的基因工程重组 | 第15-17页 |
| ·佐剂CTB的广泛应用 | 第17-22页 |
| ·CTB的结构功能及特点 | 第17页 |
| ·CTB在传统免疫反应中的应用 | 第17-19页 |
| ·CTB在基因工程中的应用 | 第19-20页 |
| ·CTB新的功能的探索 | 第20-22页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第22-32页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优点 | 第22页 |
| ·毕赤酵母表达宿主菌 | 第22-23页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第23-24页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第24-28页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的生物学特性 | 第28页 |
| ·巴氏毕赤酵母的分子生物学特性 | 第28-29页 |
| ·影响异源蛋白在巴斯德毕赤酵母中表达水平的研究 | 第29-32页 |
| ·酵母细胞固定化的应用 | 第32-35页 |
| ·固定化细胞生物反应器在医药上的应用 | 第33页 |
| ·传统的固定化细胞技术应用 | 第33-34页 |
| ·无载体固定化细胞技术的应用 | 第34-35页 |
| ·植物生物反应器 | 第35-41页 |
| ·转基因植物生产药物蛋白发展现状 | 第35-36页 |
| ·植物生物反应器的优点 | 第36页 |
| ·存在的问题及解决方法 | 第36-39页 |
| ·转基因植物生产药物蛋白的表达策略 | 第39-40页 |
| ·向日葵作为植物生物反应器的优势 | 第40-41页 |
| 第二章 毕赤酵母和植物表达载体的构建及验证 | 第41-70页 |
| ·实验材料 | 第41-46页 |
| ·质粒、菌株和引物 | 第41-42页 |
| ·主要实验仪器 | 第42-43页 |
| ·主要试剂 | 第43-44页 |
| ·培养基 | 第44-45页 |
| ·主要溶液 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-52页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第46-47页 |
| ·小规模提取大肠杆菌质粒法（CTAB法） | 第47-48页 |
| ·DNA的限制酶消化 | 第48页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第48-49页 |
| ·从琼脂糖中回收DNA | 第49页 |
| ·DNA的连接反应 | 第49-50页 |
| ·用TRIzol试剂一步法提取新鲜材料中的总RNA | 第50页 |
| ·PCR扩增反应 | 第50-51页 |
| ·菌体生长量的检测 | 第51页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶的制备 | 第51-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-64页 |
| ·中间载体pBluescript SK-CTB-Furin-LK的构建 | 第52-55页 |
| ·表达载体pX6-CTB-LK构建过程 | 第55-58页 |
| ·植物表达载体pBI121-CTB-LK的构建 | 第58-60页 |
| ·毕赤酵母表达CTB-LK的载体构建 | 第60-63页 |
| ·毕赤酵母表达载体溶菌酶载体的构建 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-68页 |
| ·定位信号的应用 | 第64页 |
| ·筛选标记基因的利用和删除 | 第64-65页 |
| ·实验操作过程中的遇到的一些问题 | 第65-68页 |
| ·小结 | 第68-70页 |
| 第三章 CTB-LK在毕赤酵母中的表达及验证 | 第70-91页 |
| ·实验材料 | 第70-72页 |
| ·质粒和菌株 | 第70页 |
| ·主要仪器（同第二章2.1.2） | 第70页 |
| ·试剂 | 第70页 |
| ·培养基及主要溶液 | 第70-72页 |
| ·实验方法 | 第72-80页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第72-74页 |
| ·转化子的筛选 | 第74-75页 |
| ·酵母菌落PCR筛选阳性克隆 | 第75页 |
| ·毕赤酵母总RNA提取 | 第75-76页 |
| ·毕赤酵母的诱导表达 | 第76页 |
| ·发酵上清液中蛋白的提取 | 第76-77页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳 | 第77-78页 |
| ·SDS-PAGE的考马斯亮兰染色 | 第78页 |
| ·纤维蛋白平板检验生物活性 | 第78-79页 |
| ·尿激酶纤维蛋白平板法标准曲线测定 | 第79页 |
| ·小鼠的饲养及血栓模型的建立 | 第79页 |
| ·小鼠凝血时间检测 | 第79页 |
| ·小鼠血浆纤维蛋白原含量测定 | 第79-80页 |
| ·结果讨论 | 第80-89页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第80页 |
| ·毕赤酵母的转化后G418 筛选 | 第80-82页 |
| ·菌落PCR筛选效果 | 第82页 |
| ·尿激酶标准品纤维平板实验 | 第82-83页 |
| ·纤维蛋白平板法测定外源蛋白活性 | 第83-84页 |
| ·上清液SDS-PAGE检测 | 第84-85页 |
| ·小鼠血栓模型的建立 | 第85-86页 |
| ·提取药物蛋白抗血栓活力的检测 | 第86-87页 |
| ·小鼠血纤维蛋白原含量的测定 | 第87-88页 |
| ·小鼠凝血时间检测 | 第88-89页 |
| ·小结 | 第89-91页 |
| 第四章 毕赤酵母培养过程相关条件的优化 | 第91-113页 |
| ·实验材料 | 第91-92页 |
| ·质粒和菌株 | 第91页 |
| ·主要仪器（同第二章2.1.2） | 第91页 |
| ·试剂 | 第91-92页 |
| ·试验方法 | 第92-94页 |
| ·重组毕赤酵母摇瓶发酵条件的研究 | 第92-93页 |
| ·重组毕赤酵母自身生物包埋的研究 | 第93-94页 |
| ·结果与分析 | 第94-111页 |
| ·转化子摇瓶发酵培养条件的研究 | 第94-101页 |
| ·毕赤酵母表达溶菌酶催化前体对酵母自包埋实验 | 第101-109页 |
| ·毕赤酵母表达溶菌酶催化前体对酵母自包埋实验 | 第109-111页 |
| ·小结 | 第111-113页 |
| 第五章 农杆菌介导的向日葵遗传转化 | 第113-132页 |
| ·实验材料 | 第113-115页 |
| ·质粒、菌株和种子 | 第113页 |
| ·主要仪器（同第二章2.1.2） | 第113页 |
| ·试剂 | 第113-114页 |
| ·培养基 | 第114-115页 |
| ·实验方法 | 第115-120页 |
| ·种子的无菌处理 | 第115页 |
| ·外植体的准备 | 第115-116页 |
| ·工程农杆菌的制备 | 第116-117页 |
| ·农杆菌的培养 | 第117页 |
| ·共培养 | 第117页 |
| ·筛选方案与转基因植株再生 | 第117-118页 |
| ·组培苗的移栽 | 第118页 |
| ·向日葵基因组DNA小量抽提 | 第118页 |
| ·转基因向日葵的RT-PCR检测 | 第118-120页 |
| ·结果与分析 | 第120-125页 |
| ·pX6-CTB-LK转化农杆菌C58 的PCR检测结果 | 第120-121页 |
| ·向日葵的不同阶段生长状态 | 第121-123页 |
| ·转基因向日葵的 PCR 检测 | 第123页 |
| ·转基因向日葵的RT-PCR鉴定 | 第123-125页 |
| ·讨论 | 第125-130页 |
| ·影响向日葵组织培养的主要因素 | 第125-126页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第126-128页 |
| ·向日葵组培过程中常见问题及对策 | 第128-130页 |
| ·小结 | 第130-132页 |
| 第六章 结论展望 | 第132-137页 |
| ·研究总结 | 第132-134页 |
| ·研究创新点 | 第134-135页 |
| ·展望 | 第135-137页 |
| 参考文献 | 第137-147页 |
| 发表论文和科研情况说明 | 第147-148页 |
| 致谢 | 第148页 |
