| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-36页 |
| 1 植物感受逆境胁迫的分子机制 | 第14-19页 |
| ·植物抗渗透胁迫的调节 | 第15-16页 |
| ·依赖ABA但不需要蛋白质合成的信号转导途径 | 第15-16页 |
| ·依赖ABA且需要蛋白质合成的信号转导途径 | 第16页 |
| ·不依赖ABA的信号转导途径 | 第16页 |
| ·抗渗透胁迫中直接起作用的蛋白质 | 第16-19页 |
| ·LEA蛋白 | 第17页 |
| ·渗透调节物质 | 第17-19页 |
| ·抗氧化酶系统 | 第19页 |
| 2 植物转录因子在逆境胁迫中的作用 | 第19-27页 |
| ·转录因子的概念和结构 | 第19-23页 |
| ·DNA结合域 | 第20-21页 |
| ·转录调控域 | 第21-22页 |
| ·核定位信号 | 第22页 |
| ·寡聚化位点 | 第22-23页 |
| ·转录因子的活性调控 | 第23页 |
| ·转译后修饰 | 第23页 |
| ·细胞核定位 | 第23页 |
| ·二聚体化作用 | 第23页 |
| ·转录因子的逆境信号传导过程 | 第23-24页 |
| ·植物转录因子的特征与种类 | 第24-27页 |
| ·锌指(zinc-finger)蛋白 | 第24页 |
| ·bZIP类转录因子 | 第24-25页 |
| ·MYC/MYB类转录因子 | 第25-26页 |
| ·MADS盒结构 | 第26页 |
| ·WRKY转录因子 | 第26页 |
| ·AP2/EREBP类转录因子 | 第26-27页 |
| 3 植物AP2/EREBP转录因子家族的研究 | 第27-34页 |
| ·AP2/EREBP转录因子家族 | 第27-28页 |
| ·AP2/EREBP转录因子的功能 | 第28-30页 |
| ·参与植物生长发育 | 第29页 |
| ·参与生物胁迫应答 | 第29-30页 |
| ·参与非生物胁迫应答 | 第30页 |
| ·DREB类转录因子及其转基因研究进展 | 第30-34页 |
| ·DREB类转录因子及其克隆 | 第30-33页 |
| ·DREB类转录因子转基因研究进展 | 第33-34页 |
| 4 研究的目的和研究内容 | 第34-36页 |
| ·立题依据 | 第34-35页 |
| ·技术路线 | 第35-36页 |
| 第二章 碱蓬SsDREB基因的克隆与表达分析研究 | 第36-56页 |
| 1 材料与方法 | 第36-46页 |
| ·实验材料及试剂 | 第36-37页 |
| ·植物材料 | 第36页 |
| ·主要试剂、酶类及菌种 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-46页 |
| ·CTAB法提取碱蓬DNA | 第37页 |
| ·PCR扩增DREB同源基因基因组片段 | 第37-38页 |
| ·PCR产物的克隆和鉴定 | 第38-39页 |
| ·3'末端序列的克隆 | 第39-41页 |
| ·5'末端序列的克隆 | 第41-43页 |
| ·cDNA全长及基因组全长序列的获得 | 第43-44页 |
| ·生物信息学分析 | 第44页 |
| ·采用半定量RT-PCR法进行表达分析 | 第44-45页 |
| ·实时定量PCR分析表达特性 | 第45-46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-54页 |
| ·基因组片段的克隆 | 第46页 |
| ·cDNA全长序列的克隆 | 第46-47页 |
| ·基因组全长的克隆 | 第47页 |
| ·SsDREB的核苷酸序列及氨基酸序列分析 | 第47-50页 |
| ·SsDREB氨基酸序列的同源性比较与系统发育分析 | 第50-52页 |
| ·SsDREB蛋白的三级结构预测 | 第52页 |
| ·SsDREB基因组织表达特异性分析 | 第52-53页 |
| ·SsDREB基因在不同胁迫下的表达模式分析 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| 第三章 碱蓬SsDREB基因结合活性的功能验证 | 第56-66页 |
| 1 材料与方法 | 第56-61页 |
| ·实验材料 | 第56-57页 |
| ·菌株及质粒 | 第56页 |
| ·化学试剂和酶制剂 | 第56页 |
| ·酵母培养培养基 | 第56-57页 |
| ·酵母单杂交系统中使用的溶液及缓冲液 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-61页 |
| ·cDNAAD融合表达载体的构建的构建 | 第57-59页 |
| ·顺式作用元件和突变元件的合成 | 第59页 |
| ·鱼饵质粒pHIS2.1-DRE和pHis2.1-mDRE的构建 | 第59-60页 |
| ·酵母感受态细胞的制备及转化 | 第60-61页 |
| 2 结果与分析 | 第61-64页 |
| ·鱼饵质粒的构建 | 第61-62页 |
| ·pGADT7-Rec2-SsDREB表达载体的构建 | 第62-64页 |
| ·碱蓬SsDREB蛋白与DRE元件相互作用的研究 | 第64页 |
| 3 讨论 | 第64-66页 |
| 第四章 碱蓬SsDREB基因的烟草转化与功能分析 | 第66-84页 |
| 1 实验材料与方法 | 第66-72页 |
| ·实验材料 | 第66-67页 |
| ·植物材料 | 第66页 |
| ·菌株及载体 | 第66页 |
| ·实验中所用试剂与药品 | 第66页 |
| ·培养基 | 第66-67页 |
| ·方法 | 第67-72页 |
| ·植物高效表达载体pCAMBIA2301-SsDREB的构建 | 第67-68页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第68-69页 |
| ·转基因烟草的筛选 | 第69-70页 |
| ·转基因烟草的耐胁迫性分析 | 第70页 |
| ·植株光合参数和荧光参数的测定 | 第70页 |
| ·植株脯氨酸含量的测定 | 第70-71页 |
| ·植株可溶性糖含量的测定 | 第71页 |
| ·半定量RT-PCR分析下游基因的表达 | 第71-72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-80页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第72-73页 |
| ·表达载体pCAMBIA2301-SsDREB的构建 | 第72页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第72-73页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第73页 |
| ·含有表达载体的农杆菌PCR检测 | 第73-74页 |
| ·转SsDREB基因烟草的获得 | 第74页 |
| ·转基因阳性植株的鉴定 | 第74-75页 |
| ·转基因烟草的DNA水平检测 | 第74-75页 |
| ·转基因烟草的RT-PCR检测 | 第75页 |
| ·转基因烟草的抗旱性和耐盐性分析 | 第75-76页 |
| ·转基因烟草光合参数的测定 | 第76-77页 |
| ·转基因烟草的荧光参数测定 | 第77页 |
| ·转基因烟草在逆境条件下脯氨酸含量的测定 | 第77-78页 |
| ·转基因烟草在逆境条件下可溶性糖含量的测定 | 第78-79页 |
| ·半定量RT-PCR法分析下游基因的表达 | 第79-80页 |
| 3 讨论 | 第80-84页 |
| 第五章 全文结论 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-96页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
