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东方巴贝斯虫新型诊断方法的建立和基因组序列测定与分析

中文摘要第1-11页
Abstract第11-16页
缩略语表第16-18页
1 文献综述第18-33页
   ·梨形虫病概述第18-21页
     ·巴贝斯虫病概述第18-19页
     ·泰勒虫病概述第19页
     ·巴贝斯虫和泰勒虫的生活史第19-21页
   ·梨形虫的诊断第21-26页
     ·病原学检测第21-22页
     ·血清学诊断第22-23页
     ·分子生物学诊断第23-26页
   ·梨形虫基因组特征第26-30页
     ·巴贝斯虫基因组特征第28-29页
     ·泰勒虫基因组特征第29-30页
   ·顶器门寄生虫线粒体基因组研究进展第30-33页
2 东方巴贝斯虫反向线性斑点杂交(RLB)检测方法的建立第33-64页
   ·研究的目的和意义第33-34页
   ·材料与方法第34-42页
     ·主要仪器和试剂第34-35页
     ·引物和探针第35-37页
     ·降落PCR第37-38页
     ·反向线性斑点杂交(RLB)第38-40页
     ·血液样品的采集第40-41页
     ·样品的检测第41页
     ·18S rRNA和ITS的克隆、测序第41-42页
     ·系统进化分析第42页
   ·结果第42-59页
     ·降落PCR和RLB杂交第42-44页
     ·中国水牛血液样品的检测第44-45页
     ·中国梅花鹿血液样品的检测第45页
     ·南非山羊和绵羊血液样品的检测第45-46页
     ·18S rRNA和/或ITS基因的克隆测序第46-51页
     ·系统进化分析第51-59页
   ·讨论第59-64页
     ·中国水牛血液样品的检测第59-60页
     ·中国梅花鹿血液样品的检测第60-61页
     ·南非绵羊和山羊血液样品的检测第61-64页
3 东方巴贝斯虫环介导恒温扩增检测方法的建立第64-76页
   ·研究的目的和意义第64-65页
   ·材料与方法第65-69页
     ·质粒、菌株和虫种第65页
     ·主要试剂和仪器第65页
     ·水牛血液样品第65页
     ·DNA模板的提取第65-66页
     ·LAMP引物的设计第66-67页
     ·LAMP目的片段测序第67页
     ·LAMP反应体系和反应条件第67页
     ·LAMP反应体系的优化第67-68页
     ·Semi-nested PCR第68页
     ·LAMP的临床应用第68页
     ·统计分析第68-69页
   ·结果第69-73页
     ·LAMP内外引物浓度第69页
     ·LAMP反应温度的优化第69-70页
     ·LAMP特异性试验第70-71页
     ·LAMP产物的验证第71-72页
     ·LAMP的临床应用第72-73页
     ·统计学分析第73页
   ·讨论第73-76页
4 东方巴贝斯虫荧光定量检测方法的建立第76-84页
   ·研究的目的和意义第76-77页
   ·材料与方法第77-79页
     ·虫种第77页
     ·主要仪器和试剂第77页
     ·水牛血液样品第77页
     ·实验方法第77-79页
   ·结果与分析第79-82页
     ·Real-time PCR的敏感性第79页
     ·Real-time PCR的特异性第79-80页
     ·Real-time PCR临床应用第80-82页
   ·讨论第82-84页
5 东方巴贝斯虫免疫相关基因的克隆及分子生物学特性第84-110页
   ·研究的目的和意义第84-85页
   ·材料与方法第85-88页
     ·载体和菌株第85-87页
     ·主要试剂第87页
     ·主要溶液的配制第87-88页
   ·试验方法第88-91页
     ·cDNA文库的免疫筛选第88页
     ·免疫相关基因的克隆和测序第88页
     ·免疫相关基因的原核表达第88-89页
     ·可溶性表达产物的提取第89页
     ·SDS-PAGE电泳第89-90页
     ·Western-blot试验第90页
     ·系统进化分析第90-91页
   ·结果第91-108页
     ·免疫相关基因的筛选第91页
     ·PCR引物的设计第91-92页
     ·东方巴贝斯虫B04基因(核动蛋白基因)的特性第92-97页
     ·东方巴贝斯虫B05基因(假定蛋白基因)的特性第97-101页
     ·东方巴贝斯虫HSP70基因(热休克蛋白基因)的特性第101-108页
   ·讨论第108-110页
6 东方巴贝斯虫核基因组和线粒体基因组测序第110-127页
   ·研究的目的和意义第110-111页
   ·材料和方法第111-115页
     ·虫种第111页
     ·主要仪器和试剂第111-112页
     ·试验动物第112页
     ·东方巴贝斯虫的纯化第112页
     ·东方巴贝斯虫总DNA高通量测序第112-113页
     ·线粒体基因组的克隆和测序第113-115页
   ·结果第115-124页
     ·全基因的基本特性第115-116页
     ·东方巴贝斯虫功能基因的分类第116-117页
     ·线粒体基因组第117-124页
   ·讨论第124-127页
     ·全基因测序第124-125页
     ·线粒体基因组第125-127页
结论第127-128页
参考文献第128-145页
致谢第145-146页
附录1第146-147页
附录2第147-148页

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