中文摘要 | 第1-11页 |
Abstract | 第11-16页 |
缩略语表 | 第16-18页 |
1 文献综述 | 第18-33页 |
·梨形虫病概述 | 第18-21页 |
·巴贝斯虫病概述 | 第18-19页 |
·泰勒虫病概述 | 第19页 |
·巴贝斯虫和泰勒虫的生活史 | 第19-21页 |
·梨形虫的诊断 | 第21-26页 |
·病原学检测 | 第21-22页 |
·血清学诊断 | 第22-23页 |
·分子生物学诊断 | 第23-26页 |
·梨形虫基因组特征 | 第26-30页 |
·巴贝斯虫基因组特征 | 第28-29页 |
·泰勒虫基因组特征 | 第29-30页 |
·顶器门寄生虫线粒体基因组研究进展 | 第30-33页 |
2 东方巴贝斯虫反向线性斑点杂交(RLB)检测方法的建立 | 第33-64页 |
·研究的目的和意义 | 第33-34页 |
·材料与方法 | 第34-42页 |
·主要仪器和试剂 | 第34-35页 |
·引物和探针 | 第35-37页 |
·降落PCR | 第37-38页 |
·反向线性斑点杂交(RLB) | 第38-40页 |
·血液样品的采集 | 第40-41页 |
·样品的检测 | 第41页 |
·18S rRNA和ITS的克隆、测序 | 第41-42页 |
·系统进化分析 | 第42页 |
·结果 | 第42-59页 |
·降落PCR和RLB杂交 | 第42-44页 |
·中国水牛血液样品的检测 | 第44-45页 |
·中国梅花鹿血液样品的检测 | 第45页 |
·南非山羊和绵羊血液样品的检测 | 第45-46页 |
·18S rRNA和/或ITS基因的克隆测序 | 第46-51页 |
·系统进化分析 | 第51-59页 |
·讨论 | 第59-64页 |
·中国水牛血液样品的检测 | 第59-60页 |
·中国梅花鹿血液样品的检测 | 第60-61页 |
·南非绵羊和山羊血液样品的检测 | 第61-64页 |
3 东方巴贝斯虫环介导恒温扩增检测方法的建立 | 第64-76页 |
·研究的目的和意义 | 第64-65页 |
·材料与方法 | 第65-69页 |
·质粒、菌株和虫种 | 第65页 |
·主要试剂和仪器 | 第65页 |
·水牛血液样品 | 第65页 |
·DNA模板的提取 | 第65-66页 |
·LAMP引物的设计 | 第66-67页 |
·LAMP目的片段测序 | 第67页 |
·LAMP反应体系和反应条件 | 第67页 |
·LAMP反应体系的优化 | 第67-68页 |
·Semi-nested PCR | 第68页 |
·LAMP的临床应用 | 第68页 |
·统计分析 | 第68-69页 |
·结果 | 第69-73页 |
·LAMP内外引物浓度 | 第69页 |
·LAMP反应温度的优化 | 第69-70页 |
·LAMP特异性试验 | 第70-71页 |
·LAMP产物的验证 | 第71-72页 |
·LAMP的临床应用 | 第72-73页 |
·统计学分析 | 第73页 |
·讨论 | 第73-76页 |
4 东方巴贝斯虫荧光定量检测方法的建立 | 第76-84页 |
·研究的目的和意义 | 第76-77页 |
·材料与方法 | 第77-79页 |
·虫种 | 第77页 |
·主要仪器和试剂 | 第77页 |
·水牛血液样品 | 第77页 |
·实验方法 | 第77-79页 |
·结果与分析 | 第79-82页 |
·Real-time PCR的敏感性 | 第79页 |
·Real-time PCR的特异性 | 第79-80页 |
·Real-time PCR临床应用 | 第80-82页 |
·讨论 | 第82-84页 |
5 东方巴贝斯虫免疫相关基因的克隆及分子生物学特性 | 第84-110页 |
·研究的目的和意义 | 第84-85页 |
·材料与方法 | 第85-88页 |
·载体和菌株 | 第85-87页 |
·主要试剂 | 第87页 |
·主要溶液的配制 | 第87-88页 |
·试验方法 | 第88-91页 |
·cDNA文库的免疫筛选 | 第88页 |
·免疫相关基因的克隆和测序 | 第88页 |
·免疫相关基因的原核表达 | 第88-89页 |
·可溶性表达产物的提取 | 第89页 |
·SDS-PAGE电泳 | 第89-90页 |
·Western-blot试验 | 第90页 |
·系统进化分析 | 第90-91页 |
·结果 | 第91-108页 |
·免疫相关基因的筛选 | 第91页 |
·PCR引物的设计 | 第91-92页 |
·东方巴贝斯虫B04基因(核动蛋白基因)的特性 | 第92-97页 |
·东方巴贝斯虫B05基因(假定蛋白基因)的特性 | 第97-101页 |
·东方巴贝斯虫HSP70基因(热休克蛋白基因)的特性 | 第101-108页 |
·讨论 | 第108-110页 |
6 东方巴贝斯虫核基因组和线粒体基因组测序 | 第110-127页 |
·研究的目的和意义 | 第110-111页 |
·材料和方法 | 第111-115页 |
·虫种 | 第111页 |
·主要仪器和试剂 | 第111-112页 |
·试验动物 | 第112页 |
·东方巴贝斯虫的纯化 | 第112页 |
·东方巴贝斯虫总DNA高通量测序 | 第112-113页 |
·线粒体基因组的克隆和测序 | 第113-115页 |
·结果 | 第115-124页 |
·全基因的基本特性 | 第115-116页 |
·东方巴贝斯虫功能基因的分类 | 第116-117页 |
·线粒体基因组 | 第117-124页 |
·讨论 | 第124-127页 |
·全基因测序 | 第124-125页 |
·线粒体基因组 | 第125-127页 |
结论 | 第127-128页 |
参考文献 | 第128-145页 |
致谢 | 第145-146页 |
附录1 | 第146-147页 |
附录2 | 第147-148页 |