| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1 引言 | 第11-17页 |
| ·综述 | 第11-15页 |
| ·干扰素的种类和结构 | 第11-12页 |
| ·干扰素的生物学特性 | 第12-13页 |
| ·猪α干扰素的研究进展 | 第13-15页 |
| ·研究内容 | 第15页 |
| ·猪IFN-α1 全基因的克隆与重组质粒的构建 | 第15页 |
| ·猪IFN-α1 的原核表达与鉴定 | 第15页 |
| ·技术路线 | 第15-16页 |
| ·研究目的与意义 | 第16页 |
| ·研究目标 | 第16-17页 |
| 2 材料 | 第17-25页 |
| ·载体与菌株 | 第17页 |
| ·实验动物 | 第17页 |
| ·试剂 | 第17页 |
| ·主要试剂及配方 | 第17-23页 |
| ·RNA 提取试剂 | 第18页 |
| ·细胞培养用溶液 | 第18-19页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化用溶液 | 第19页 |
| ·质粒DNA 提取用溶液 | 第19-20页 |
| ·诱导表达用溶液 | 第20页 |
| ·SDS-PAGE 电泳用溶液 | 第20-21页 |
| ·包涵体纯化相关试剂 | 第21-22页 |
| ·Western blot 用溶液 | 第22-23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳用溶液 | 第23页 |
| ·血清及抗体 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23-25页 |
| 3 方法 | 第25-36页 |
| ·猪外周血淋巴细胞的分离与体外培养 | 第25页 |
| ·猪外周血淋巴细胞总 RNA 的提取 | 第25页 |
| ·猪Α1 干扰素基因的克隆 | 第25-29页 |
| ·引物设计与合成 | 第25-26页 |
| ·猪IFN-α1 全基因扩增RT-PCR | 第26页 |
| ·PCR 产物的纯化与回收 | 第26-27页 |
| ·目的基因与pGEM-T 载体的连接 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与连接产物的转化 | 第27-28页 |
| ·质粒DNA 的小量制备-碱裂解法 | 第28页 |
| ·鉴定 | 第28-29页 |
| ·猪IFNΑ1 基因的原核重组表达载体的构建与鉴定 | 第29-32页 |
| ·引物的设计与合成 | 第29页 |
| ·目的基因的PCR 扩增 | 第29-30页 |
| ·poIFN-α1 基因PCR 产物与表达载体质粒pGEX-6P-1 的酶切 | 第30页 |
| ·纯化回收酶切后的目的基因和表达载体DNA | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和目的基因与载体DNA 的连接与转化 | 第31页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第31-32页 |
| ·基因工程重组表达菌的诱导表达 | 第32-34页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第32-33页 |
| ·表达蛋白的可溶性检测 | 第33页 |
| ·重组poIFNα1 蛋白的纯化回收 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白的WESTERN BLOT 鉴定 | 第34-36页 |
| 4 结果与分析 | 第36-42页 |
| ·猪IFN-Α1 全基因的克隆 | 第36页 |
| ·原核重组表达质粒PGEX-6P-POIFNΑ1 的构建 | 第36-38页 |
| ·原核重组表达质粒pGEX-6P-poIFNα1 的鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组表达质粒pGEX-6P-poIFNα1 的序列测定与分析 | 第37-38页 |
| ·重组POIFN-Α1 蛋白诱导表达的SDS-PAGE 分析 | 第38-41页 |
| ·重组poIFN-α1 蛋白的包涵体表达 | 第38-39页 |
| ·重组poIFN-α1 的最佳诱导时间 | 第39页 |
| ·poIFN-α1 的最适 IPTG 诱导浓度与温度 | 第39-40页 |
| ·重组poIFN-α1 蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| ·重组POIFN-Α1 的WESTERN-BLOT 鉴定 | 第41-42页 |
| 5 讨论 | 第42-46页 |
| ·猪IFN-Α1 基因 | 第42页 |
| ·表达方法的选择 | 第42-43页 |
| ·重组猪IFN-Α1 包涵体蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| ·重组猪IFN-Α1 蛋白条件优化 | 第44-46页 |
| 6 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-50页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第50-51页 |
| 作者简介 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
