| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-41页 |
| 1.1 乙酰化修饰 | 第12-21页 |
| 1.1.1 乙酰化修饰的调控机制及其生理作用 | 第12-15页 |
| 1.1.2 Sirtuins在生命活动中的重要作用及其调控机制 | 第15-18页 |
| 1.1.3 SIRT3 与代谢的关系 | 第18-21页 |
| 1.2 SUMO化修饰 | 第21-33页 |
| 1.2.1 SUMO蛋白的结构和分类 | 第22页 |
| 1.2.2 SUMO化修饰发生的过程及调控该过程的酶 | 第22-25页 |
| 1.2.3 SUMO化修饰的作用 | 第25-28页 |
| 1.2.4 去SUMO化酶的种类和特征 | 第28-29页 |
| 1.2.5 SENPs的作用和功能及调控SENPs的机制 | 第29-33页 |
| 1.3 线粒体是细胞的代谢中心 | 第33-37页 |
| 1.3.1 线粒体蛋白质 | 第33-34页 |
| 1.3.2 蛋白质进入线粒体内的途径 | 第34-36页 |
| 1.3.3 线粒体代谢与sirtuins家族 | 第36-37页 |
| 1.4 本研究的理论依据、内容与意义 | 第37-41页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第41-60页 |
| 2.1 实验材料 | 第41-46页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第41页 |
| 2.1.2 细胞 | 第41页 |
| 2.1.3 试剂 | 第41-43页 |
| 2.1.4 耗材 | 第43-44页 |
| 2.1.5 抗体 | 第44-45页 |
| 2.1.6 仪器 | 第45-46页 |
| 2.2 实验方法 | 第46-60页 |
| 2.2.1 点突变质粒构建 | 第46-48页 |
| 2.2.2 转化 | 第48页 |
| 2.2.3 细胞脂质体转染法 | 第48-49页 |
| 2.2.4 细胞磷酸钙转染法 | 第49页 |
| 2.2.5 稳转细胞系构建 | 第49-50页 |
| 2.2.6 免疫沉淀实验(Immunoprecipitation,IP) | 第50页 |
| 2.2.7 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB) | 第50-51页 |
| 2.2.8 乙酰化Western Blot | 第51页 |
| 2.2.9 冷冻超薄切片及免疫金标记 | 第51-53页 |
| 2.2.10 线粒体提取 | 第53-54页 |
| 2.2.11 亚细胞结构分离 | 第54页 |
| 2.2.12 细胞ATP检测 | 第54页 |
| 2.2.13 液相色谱-质谱串联法(Liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS) | 第54-55页 |
| 2.2.14 细胞免疫荧光(Immunofluorescence,IF) | 第55页 |
| 2.2.15 原代肝细胞获取以及培养 | 第55-56页 |
| 2.2.16 细胞线粒体耗氧能力(OCR)检测 | 第56页 |
| 2.2.17 考马斯亮蓝染色 | 第56-57页 |
| 2.2.18 RNA抽提、反转录PCR和实时定量PCR | 第57-59页 |
| 2.2.19 小鼠胚胎获取及基因型鉴定 | 第59页 |
| 2.2.20 统计学方法及作图 | 第59-60页 |
| 第三章 结果与分析 | 第60-80页 |
| 3.1 线粒体内SIRT3 能发生SUMO化修饰 | 第60-65页 |
| 3.1.1 线粒体中蛋白质的SUMO化修饰与乙酰化修饰有联系 | 第60页 |
| 3.1.2 线粒体中的SIRT3 能发生SUMO化修饰 | 第60-62页 |
| 3.1.3 SUMO化修饰抑制SIRT3 的去乙酰化酶活性 | 第62-65页 |
| 3.2 SENP1 是线粒体中SIRT3的SUMO化修饰及活性的调控因子 | 第65-69页 |
| 3.2.1 SENP1 是特异的SIRT3去SUMO化修饰酶 | 第65-67页 |
| 3.2.2 饥饿促进SENP1 转运到线粒体内 | 第67-69页 |
| 3.2.3 SENP1 通过TOM复合体进入线粒体 | 第69页 |
| 3.3 SENP1 调控线粒体对代谢应激的适应性反应 | 第69-74页 |
| 3.3.1 饥饿导致的SIRT3去SUMO化过程依赖于SENP | 第69-71页 |
| 3.3.2 SENP1 是细胞饥饿时线粒体脂肪酸β-氧化与能量代谢的重要调控因子 | 第71-74页 |
| 3.4 SIRT3 调控SENP1 乙酰化修饰和去SUMO化修饰活性 | 第74-78页 |
| 3.4.1 SENP1 能发生乙酰化修饰并且是SIRT3 的底物蛋白 | 第74-76页 |
| 3.4.2 乙酰化修饰抑制SENP1 的去SUMO化酶活性 | 第76-78页 |
| 3.5 结论 | 第78-80页 |
| 第三章 讨论 | 第80-86页 |
| 4.1 调控SIRT3 活性的新方式 | 第80-81页 |
| 4.2 饥饿促进SENP1 进入线粒体的具体机制 | 第81-82页 |
| 4.3 影响SENP1 乙酰化修饰的生理刺激 | 第82-83页 |
| 4.4 乙酰化修饰抑制SENP1去SUMO化功能的具体机制 | 第83-84页 |
| 4.5 SENP1-SIRT3 轴是线粒体能量代谢的重要调控机制之一 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-98页 |
| 附录一 常用试剂配方 | 第98-102页 |
| 附录二 缩略词语表 | 第102-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 学术论文和科研成果目录 | 第105页 |
