| 摘要 | 第14-16页 |
| Abstract | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-35页 |
| 1.1 米曲霉作为外源表达宿主研究进展 | 第19-26页 |
| 1.1.1 米曲霉的基本特性 | 第19页 |
| 1.1.2 米曲霉在食品工业中的应用 | 第19-20页 |
| 1.1.3 米曲霉表达系统研究进展 | 第20-24页 |
| 1.1.4 自剪切肽在多顺反子载体构建中的应用 | 第24-26页 |
| 1.2 微生物蛋白酶 | 第26-30页 |
| 1.2.1 微生物蛋白酶的分类 | 第26页 |
| 1.2.2 碱性蛋白酶 | 第26-27页 |
| 1.2.3 中性蛋白酶 | 第27-28页 |
| 1.2.4 酸性蛋白酶 | 第28页 |
| 1.2.5 微生物蛋白酶在食品工业的应用 | 第28-29页 |
| 1.2.6 微生物蛋白酶的外源表达 | 第29-30页 |
| 1.3 微生物发酵豆粕生产大豆多肽研究进展 | 第30-33页 |
| 1.3.1 豆粕蛋白资源利用现状 | 第30页 |
| 1.3.2 微生物发酵法生产大豆多肽 | 第30-32页 |
| 1.3.3 大豆多肽生物活性研究 | 第32-33页 |
| 1.4 本研究的目的意义及主要研究内容 | 第33-35页 |
| 1.4.1 目的意义 | 第33页 |
| 1.4.2 主要研究内容 | 第33-35页 |
| 第二章 不同蛋白酶基因的扩增及序列分析 | 第35-57页 |
| 2.1 材料与方法 | 第35-44页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第35-37页 |
| 2.1.2 地衣芽胞杆菌碱性蛋白基因subC、aprB的扩增 | 第37-38页 |
| 2.1.3 短小芽胞杆菌碱性蛋白基因asp的扩增 | 第38-39页 |
| 2.1.4 黑曲霉总RNA的提取 | 第39-40页 |
| 2.1.5 黑曲霉RNA反转录合成cDNA | 第40页 |
| 2.1.6 黑曲霉酸性蛋白酶基因的扩增 | 第40-41页 |
| 2.1.7 PCR产物的回收纯化 | 第41-42页 |
| 2.1.8 目的基因与pMD?19(Simple)载体的连接、转化及阳性克隆的筛选 | 第42-43页 |
| 2.1.9 阳性克隆菌株中质粒的提取 | 第43-44页 |
| 2.1.10 目的基因的测序和序列分析 | 第44页 |
| 2.2 结果与分析 | 第44-54页 |
| 2.2.1 碱性蛋白酶基因扩增的结果 | 第44-45页 |
| 2.2.2 碱性蛋白酶基因序列比对及分析 | 第45-49页 |
| 2.2.3 黑曲霉总RNA提取的结果 | 第49页 |
| 2.2.4 酸性蛋白酶基因扩增的结果 | 第49-50页 |
| 2.2.5 酸性蛋白酶基因序列比对及分析 | 第50-53页 |
| 2.2.6 不同基因编码蛋白酶的信号肽序列分析结果 | 第53-54页 |
| 2.3 讨论与小结 | 第54-57页 |
| 2.3.1 讨论 | 第54-55页 |
| 2.3.2 本章小结 | 第55-57页 |
| 第三章 不同蛋白酶基因表达载体的构建 | 第57-75页 |
| 3.1 材料与方法 | 第57-67页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第57-59页 |
| 3.1.2 米曲霉表达载体阅读框的构建 | 第59-63页 |
| 3.1.3 碱性蛋白酶基因表达载体的构建 | 第63-64页 |
| 3.1.4 酸性蛋白酶基因表达载体的构建 | 第64-65页 |
| 3.1.5 碱性蛋白酶基因串联表达载体的构建 | 第65-67页 |
| 3.2 结果与分析 | 第67-73页 |
| 3.2.1 米曲霉表达载体阅读框构建的结果 | 第67-68页 |
| 3.2.2 碱性蛋白酶基因subC表达载体构建的结果 | 第68-70页 |
| 3.2.3 酸性蛋白酶基因表达载体构建的结果 | 第70-71页 |
| 3.2.4 碱性蛋白酶基因串联表达载体的构建 | 第71-73页 |
| 3.3 讨论与小结 | 第73-75页 |
| 3.3.1 讨论 | 第73-74页 |
| 3.3.2 本章小结 | 第74-75页 |
| 第四章 根瘤农杆菌介导表达载体转化米曲霉 | 第75-87页 |
| 4.1 材料与方法 | 第75-81页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第75-77页 |
| 4.1.2 不同表达载体转化根瘤农杆菌试验 | 第77-78页 |
| 4.1.3 潮霉素对米曲霉最小抑菌浓度的确定 | 第78页 |
| 4.1.4 根瘤农杆菌介导表达载体转化米曲霉 | 第78-79页 |
| 4.1.5 根瘤农杆菌介导转化体系的优化 | 第79页 |
| 4.1.6 米曲霉转化子基因组PCR检测 | 第79-80页 |
| 4.1.7 米曲霉转化子RT-PCR检测 | 第80-81页 |
| 4.2 结果与分析 | 第81-85页 |
| 4.2.1 表达载体转化根瘤农杆菌试验结果 | 第81页 |
| 4.2.2 潮霉素B对米曲霉最小抑菌浓度试验结果 | 第81-82页 |
| 4.2.3 根瘤农杆菌介导转化体系优化结果 | 第82-84页 |
| 4.2.4 米曲霉转化子基因组PCR检测结果 | 第84-85页 |
| 4.2.5 米曲霉转化子RT-PCR检测结果 | 第85页 |
| 4.3 讨论与小节 | 第85-87页 |
| 4.3.1 讨论 | 第85-86页 |
| 4.3.2 本章小结 | 第86-87页 |
| 第五章 不同米曲霉工程菌发酵作用研究 | 第87-105页 |
| 5.1 材料与方法 | 第87-92页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第87-88页 |
| 5.1.2 不同菌株蛋白酶活力测定 | 第88-89页 |
| 5.1.3 不同菌株发酵产物多肽含量测定 | 第89页 |
| 5.1.4 不同菌株发酵产物中氨基酸含量分析 | 第89-90页 |
| 5.1.5 不同菌株发酵产物SDS-PAGE分析 | 第90页 |
| 5.1.6 扫描电镜观察不同菌株发酵产物结构 | 第90页 |
| 5.1.7 不同米曲霉工程菌发酵产物的超滤分离 | 第90页 |
| 5.1.8 凝胶过滤法测定不同菌株发酵产物多肽分子量分布 | 第90页 |
| 5.1.9 不同菌株发酵产物中各组分抗氧化活性的测定 | 第90-91页 |
| 5.1.10 数据统计分析 | 第91-92页 |
| 5.2 结果与分析 | 第92-102页 |
| 5.2.1 不同米曲霉工程菌蛋白酶活力比较 | 第92-93页 |
| 5.2.2 不同米曲霉工程菌发酵对多肽转化率的影响 | 第93页 |
| 5.2.3 不同米曲霉发酵对产物中氨基酸含量的影响 | 第93-95页 |
| 5.2.4 不同米曲霉工程菌发酵豆粕SDS-PAGE电泳结果 | 第95-96页 |
| 5.2.5 不同米曲霉发酵对豆粕超微结构的影响 | 第96-98页 |
| 5.2.6 不同菌株发酵产物多肽分子量分布测定结果 | 第98-100页 |
| 5.2.7 不同样品总还原能力测定结果 | 第100页 |
| 5.2.8 不同样品DPPH自由基清除作用结果 | 第100-101页 |
| 5.2.9 不同样品对羟基自由基清除作用结果 | 第101-102页 |
| 5.3 讨论与小结 | 第102-105页 |
| 5.3.1 讨论 | 第102-104页 |
| 5.3.2 本章小结 | 第104-105页 |
| 第六章 米曲霉工程菌发酵条件优化及酶的分离纯化与性质研究 | 第105-123页 |
| 6.1 材料与方法 | 第105-108页 |
| 6.1.1 试验材料 | 第105-106页 |
| 6.1.2 米曲霉工程菌pep发酵条件单因素试验 | 第106页 |
| 6.1.3 响应面法对发酵条件的优化 | 第106页 |
| 6.1.4 米曲霉工程菌asp、pep发酵粗酶液的提取 | 第106-107页 |
| 6.1.5 硫酸铵初步分离 | 第107页 |
| 6.1.6 蛋白酶DEAE-SepharoseF.F.阴离子交换层析 | 第107页 |
| 6.1.7 蛋白酶SephadexG-150凝胶过滤层析 | 第107页 |
| 6.1.8 酶分子量及含量分析 | 第107页 |
| 6.1.9 蛋白酶酶学性质研究 | 第107-108页 |
| 6.2 结果与分析 | 第108-120页 |
| 6.2.1 米曲霉pep发酵条件单因素试验结果 | 第108-110页 |
| 6.2.2 响应面分析结果 | 第110-113页 |
| 6.2.3 硫酸铵盐析结果 | 第113页 |
| 6.2.4 碱性蛋白酶ASP的纯化结果及分子量测定 | 第113-115页 |
| 6.2.5 酸性蛋白酶PEP纯化结果及分子量测定 | 第115-116页 |
| 6.2.6 蛋白酶酶学特性研究结果 | 第116-120页 |
| 6.3 讨论与小结 | 第120-123页 |
| 6.3.1 讨论 | 第120-122页 |
| 6.3.2 本章小结 | 第122-123页 |
| 第七章 结论、创新点与展望 | 第123-127页 |
| 7.1 全文结论 | 第123-125页 |
| 7.2 创新点 | 第125页 |
| 7.3 展望 | 第125-127页 |
| 参考文献 | 第127-139页 |
| 附录 | 第139-140页 |
| 致谢 | 第140-141页 |
| 攻读博士学位期间发表文章 | 第141-142页 |
