| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 主要符号对照表 | 第12-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-37页 |
| 1.1 益生菌在家禽生产中的应用 | 第17-23页 |
| 1.1.1 抗生素促生长剂的应用 | 第17-18页 |
| 1.1.2 AGPs的替代品 | 第18页 |
| 1.1.3 益生菌在家禽生产中的应用 | 第18-20页 |
| 1.1.4 屎肠球菌的在家禽生产中的应用及筛选 | 第20-23页 |
| 1.2 胆盐的生理学特性和功能 | 第23-28页 |
| 1.2.1 胆汁酸的合成及肠肝循环 | 第23-25页 |
| 1.2.2 胆盐的抑菌作用 | 第25-26页 |
| 1.2.3 益生菌耐受胆盐的分子机制 | 第26-28页 |
| 1.3 双组分调控系统 | 第28-31页 |
| 1.3.1 双组分调控系统 | 第29页 |
| 1.3.2 双组分调控系统在胆盐耐受中的作用 | 第29-30页 |
| 1.3.4 屎肠球菌双组分系统的研究 | 第30-31页 |
| 1.4 肠道微生物对宿主胆盐代谢的影响 | 第31-36页 |
| 1.4.1 肠道微生物对胆汁酸合成的调节作用 | 第31-33页 |
| 1.4.2 肠道微生物对胆汁酸代谢的调控 | 第33-35页 |
| 1.4.3 微生物对宿主能量代谢的影响 | 第35-36页 |
| 1.5 本研究的目的和内容 | 第36-37页 |
| 1.5.1 本研究的目的 | 第36页 |
| 1.5.2 本研究的内容 | 第36-37页 |
| 试验部分 | 第37-105页 |
| 第二章 屎肠球菌体外益生特性研究 | 第37-48页 |
| 2.1 试验材料 | 第37-39页 |
| 2.1.1 菌株 | 第37页 |
| 2.1.2 引物信息 | 第37-39页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第39页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第39页 |
| 2.2 试验方法 | 第39-42页 |
| 2.2.1 耐酸试验 | 第39页 |
| 2.2.2 菌株分子生物学鉴定 | 第39-40页 |
| 2.2.3 耐胆盐试验 | 第40页 |
| 2.2.4 细菌对上皮细胞粘附能力测定 | 第40页 |
| 2.2.5 抑菌试验 | 第40页 |
| 2.2.6 溶血试验 | 第40页 |
| 2.2.7 产生物被膜能力测定 | 第40-41页 |
| 2.2.8 药敏试验 | 第41页 |
| 2.2.9 毒力基因检测 | 第41-42页 |
| 2.2.10 数据分析 | 第42页 |
| 2.3 试验结果与分析 | 第42-46页 |
| 2.3.1 耐酸屎肠球菌筛选 | 第42页 |
| 2.3.2 屎肠球菌对胆盐的耐受能力 | 第42-43页 |
| 2.3.3 屎肠球菌的抑菌能力 | 第43页 |
| 2.3.4 屎肠球菌对上皮细胞的粘附率 | 第43-44页 |
| 2.3.5 屎肠球菌安全性评估 | 第44-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-47页 |
| 2.5 小结 | 第47-48页 |
| 第三章 屎肠球菌NW2和NW8 的全基因组测序及比较基因组学研究 | 第48-60页 |
| 3.1 试验材料 | 第48页 |
| 3.1.1 菌株 | 第48页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第48页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第48页 |
| 3.2 试验方法 | 第48-49页 |
| 3.2.1 屎肠球菌NW2和NW8 全基因组测序 | 第48-49页 |
| 3.2.2 基因组注释 | 第49页 |
| 3.2.3 生物信息分析 | 第49页 |
| 3.3 试验结果与分析 | 第49-58页 |
| 3.3.1 全基因组测序概况 | 第49-50页 |
| 3.3.2 屎肠球菌NW2和NW8 基因组注释 | 第50-51页 |
| 3.3.3 屎肠球菌抗逆境相关基因分析 | 第51-54页 |
| 3.3.4 屎肠球菌NW2和NW8 基因组中原噬菌体分布 | 第54页 |
| 3.3.5 屎肠球菌NW2和NW8 潜在毒力因子 | 第54-55页 |
| 3.3.6 屎肠球菌NW2和NW8 中信号调控系统分布 | 第55-57页 |
| 3.3.7 屎肠球菌NW2和NW8 与其他屎肠球菌的亲缘关系 | 第57-58页 |
| 3.4 讨论 | 第58-59页 |
| 3.5 小结 | 第59-60页 |
| 第四章 屎肠球菌双组分系统调控胆盐耐受的研究 | 第60-86页 |
| 4.1 试验材料 | 第61-67页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第61-63页 |
| 4.1.2 引物信息 | 第63页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第63页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第63-67页 |
| 4.2 试验方法 | 第67-71页 |
| 4.2.1 RNA提取、RT-PCR和 RT-qPCR | 第67-69页 |
| 4.2.2 基因突变株和回补株构建 | 第69页 |
| 4.2.3 BsrR反应调控蛋白潜在的DNA结合位点及下游靶基因预测 | 第69页 |
| 4.2.4 过表达BsrR蛋白 | 第69-70页 |
| 4.2.5 凝胶迁移实验 | 第70页 |
| 4.2.6 数据分析 | 第70-71页 |
| 4.3 试验结果与分析 | 第71-83页 |
| 4.3.1 屎肠球菌双组分系统基因的表达与胆盐耐受的相关性分析 | 第71-72页 |
| 4.3.2 liaR、liaS、RR4和HK4 基因突变对屎肠球菌胆盐耐受的影响 | 第72-74页 |
| 4.3.3 屎肠球菌双组分系统BsrRS描述 | 第74-77页 |
| 4.3.4 BsrRS系统下游靶基因鉴定 | 第77-83页 |
| 4.4 讨论 | 第83-85页 |
| 4.5 小结 | 第85-86页 |
| 第五章 屎肠球菌胆盐水解酶基因的克隆表达及功能研究 | 第86-105页 |
| 5.1 试验材料 | 第87-89页 |
| 5.1.1 菌株和质粒 | 第87页 |
| 5.1.2 引物信息 | 第87页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第87页 |
| 5.1.4 主要仪器设备 | 第87-89页 |
| 5.2 试验方法 | 第89-95页 |
| 5.2.1 平板法检测BSH活性 | 第89-90页 |
| 5.2.2 表达质粒的构建 | 第90-92页 |
| 5.2.3 BSH蛋白的表达与纯化 | 第92-93页 |
| 5.2.4 两步法测定BSH活性 | 第93页 |
| 5.2.5 测定不同温度和pH对 BSH活性的影响 | 第93页 |
| 5.2.5 测定不同化合物对BSH活性的影响 | 第93页 |
| 5.2.6 BSH序列分析 | 第93-95页 |
| 5.3 试验结果与分析 | 第95-102页 |
| 5.3.1 屎肠球菌胆盐水解酶的定性分析 | 第95-96页 |
| 5.3.2 屎肠球菌胆盐水解酶基因分析 | 第96-98页 |
| 5.3.3 屎肠球菌NW2的BSH表达纯化 | 第98-99页 |
| 5.3.4 重组蛋白rBSH1和rBSH2 的底物特性 | 第99页 |
| 5.3.5 温度对BSH活性的影响 | 第99-100页 |
| 5.3.6 pH对 BSH活性的影响 | 第100页 |
| 5.3.7 不同化合物对BSH活性的影响 | 第100-102页 |
| 5.4 讨论 | 第102-104页 |
| 5.5 小结 | 第104-105页 |
| 第六章 结论 | 第105-106页 |
| 6.1 研究结论 | 第105页 |
| 6.2 创新点 | 第105页 |
| 6.3 下一步计划 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-121页 |
| 附录 | 第121-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 个人简历 | 第131页 |
