| 致谢 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第13-31页 |
| 1 白蜡虫的利用历史 | 第13页 |
| 2 虫白蜡的特点、产量、应用及局限性 | 第13-14页 |
| 3 生物蜡对生物体本身的作用 | 第14页 |
| 4 生物蜡酯成分与含量及其随有机体生物学阶段的变化 | 第14-15页 |
| 5 蜡酯生物合成途径 | 第15-28页 |
| 5.1 生物体内蜡酯合成的途径 | 第15-18页 |
| 5.2 生物体内的脂酰辅酶A还原酶及其生化特征 | 第18-21页 |
| 5.2.1 昆虫FAR | 第18-19页 |
| 5.2.2 植物FAR | 第19-20页 |
| 5.2.3 细菌FAR | 第20页 |
| 5.2.4 单细胞真核生物FAR | 第20-21页 |
| 5.2.5 鸟类FAR | 第21页 |
| 5.2.6 哺乳动物FAR | 第21页 |
| 5.3 生物体内的FAR的生化特性决定蜡酯特异性及其生物学意义 | 第21-22页 |
| 5.4 蜡酯合成酶及其生化特征 | 第22-26页 |
| 5.4.1 植物的蜡酯合成酶和脂肪酰辅酶A:脂肪醇酰基转移酶 | 第22-24页 |
| 5.4.2 细菌的蜡酯合成酶和脂肪酰辅酶A:脂肪醇酰基转移酶 | 第24-25页 |
| 5.4.3 单细胞真核生物的蜡酯合成酶和脂肪酰辅酶A:脂肪醇酰基转移酶 | 第25页 |
| 5.4.4 昆虫的蜡酯合成酶和脂肪酰辅酶A:脂肪醇酰基转移酶 | 第25页 |
| 5.4.5 鸟类的蜡酯合成酶和脂肪酰辅酶A:脂肪醇酰基转移酶 | 第25-26页 |
| 5.4.6 哺乳动物的蜡酯合成酶和脂肪酰辅酶A:脂肪醇酰基转移酶 | 第26页 |
| 5.5 参与蜡酯合成的其他酶 | 第26-27页 |
| 5.6 认识生物体内蜡酯合成途径及关键酶对现实生产的意义 | 第27-28页 |
| 6 白蜡虫产蜡分子机制的研究基础 | 第28页 |
| 7 本研究的目的和意义 | 第28-29页 |
| 8 研究内容和技术路线 | 第29-31页 |
| 8.1 研究的主要内容 | 第29-30页 |
| 8.2 研究的技术路线 | 第30-31页 |
| 第二章 白蜡虫脂肪酰辅酶A还原酶基因EpFAR的克隆与表达载体构建 | 第31-55页 |
| 1 材料与方法 | 第31-41页 |
| 1.1 主要材料与试剂 | 第31页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第31-32页 |
| 1.3 实验方法 | 第32-41页 |
| 1.3.1 总RNA的提取 | 第32页 |
| 1.3.2 RACE扩增模板的制备 | 第32-33页 |
| 1.3.3 RACE技术扩增EpFAR基因全长 | 第33-36页 |
| 1.3.4 质粒转化DH_(5α)感受态细胞 | 第36页 |
| 1.3.5 DH_(5α)感受态细胞的制备 | 第36页 |
| 1.3.6 质粒的提取 | 第36-37页 |
| 1.3.7 EpFAR序列与其他昆虫FAR的多序列比对分析 | 第37页 |
| 1.3.8 EpFAR基因的系统发育分析 | 第37页 |
| 1.3.9 EpFAR氨基酸结构与特征分析 | 第37-39页 |
| 1.3.10 表达载体的构建 | 第39-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-53页 |
| 2.1 EpFAR基因的序列扩增结果 | 第41-42页 |
| 2.2 白蜡虫EpFAR的序列比对分析 | 第42-44页 |
| 2.3 EpFAR的系统发生分析 | 第44页 |
| 2.4 EpFAR氨基酸序列的结构与特征 | 第44-50页 |
| 2.4.1 蛋白EpFAR的一级结构 | 第44-45页 |
| 2.4.2 EpFAR的亲疏水谱 | 第45页 |
| 2.4.3 蛋白EpFAR二级结构 | 第45-46页 |
| 2.4.4 蛋白EpFAR三级结构分析 | 第46-47页 |
| 2.4.5 蛋白EpFAR的信号肽分析 | 第47-48页 |
| 2.4.6 EpFAR的跨膜结构域分析 | 第48-49页 |
| 2.4.7 EpFAR卷曲螺旋域分析 | 第49页 |
| 2.4.8 EpFAR功能结构域分析 | 第49-50页 |
| 2.5 EpFAR基因加酶切位点 | 第50-51页 |
| 2.6 目标基因与表达载体的双酶切 | 第51页 |
| 2.7 重组表达载体pFastbac HT-FAR的PCR分析 | 第51-52页 |
| 2.8 双酶切分析重组表达载体pFastbac HT-FAR | 第52-53页 |
| 2.9 测序分析重组表达载体pFastbac HT-FAR | 第53页 |
| 3 讨论 | 第53-54页 |
| 4 小结 | 第54-55页 |
| 第三章 白蜡虫脂肪酰辅酶A还原酶基因多克隆抗体的制备 | 第55-62页 |
| 1 材料与方法 | 第55-58页 |
| 1.1 主要试剂与器材 | 第55-56页 |
| 1.1.1 主要试剂 | 第55-56页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第56页 |
| 1.2 试验方法 | 第56-58页 |
| 1.2.1 抗原肽的制备 | 第56页 |
| 1.2.2 肽纯度测定 | 第56-57页 |
| 1.2.3 动物免疫与抗血清制备 | 第57页 |
| 1.2.4 抗血清的效价测定 | 第57页 |
| 1.2.5 抗体纯化 | 第57页 |
| 1.2.6 抗体浓度测定 | 第57-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-60页 |
| 2.1 合成的抗原肽的色谱检测 | 第58-59页 |
| 2.2 抗体的效价与浓度 | 第59-60页 |
| 2.3 抗体纯度 | 第60页 |
| 3 讨论 | 第60-61页 |
| 4 小结 | 第61-62页 |
| 第四章 白蜡虫脂肪酰辅酶A还原酶基因的组织表达谱 | 第62-73页 |
| 1 材料与方法 | 第62-67页 |
| 1.1 供试材料 | 第62页 |
| 1.2 主要试剂和仪器设备 | 第62-63页 |
| 1.3 实验方法 | 第63-67页 |
| 1.3.1 组织解剖制备 | 第63-64页 |
| 1.3.2 总RNA的提取 | 第64页 |
| 1.3.3 cDNA第一链的合成 | 第64页 |
| 1.3.4 引物设计 | 第64-65页 |
| 1.3.5 绝对定量标准曲线的绘制 | 第65-66页 |
| 1.3.6 qRT-PCR检测EpFAR基因在不同组织中的表达量 | 第66页 |
| 1.3.7 免疫荧光技术检测EpFAR在不同组织中的表达分布 | 第66-67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-69页 |
| 2.1 绘制的qRT-PCR反应标准曲线 | 第67页 |
| 2.2 组织总RNA提取结果 | 第67-68页 |
| 2.3 EpFAR基因在不同组织中的表达量水平 | 第68-69页 |
| 2.4 EpFAR蛋白在不同组织中的分布 | 第69页 |
| 3 讨论 | 第69-71页 |
| 4 小结 | 第71-73页 |
| 第五章 重组昆虫杆状病毒的生成与EpFAR基因在昆虫细胞中的表达与功能 | 第73-102页 |
| 1 材料与方法 | 第74-84页 |
| 1.1 主要材料与试剂 | 第74-75页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第75-76页 |
| 1.3 实验方法 | 第76-84页 |
| 1.3.1 重组杆粒的生成 | 第76页 |
| 1.3.2 PCR法分析重组杆粒 | 第76-77页 |
| 1.3.3 提取重组杆粒DNA | 第77-78页 |
| 1.3.4 DH10Bac感受态细胞的制备 | 第78页 |
| 1.3.5 昆虫细胞复苏 | 第78页 |
| 1.3.6 昆虫细胞日常培养 | 第78页 |
| 1.3.7 Grace无补充培养基制备 | 第78-79页 |
| 1.3.8 重组杆状病毒的产生 | 第79-80页 |
| 1.3.9 重组杆状病毒感染昆虫细胞 | 第80页 |
| 1.3.10 表达蛋白的提取 | 第80-81页 |
| 1.3.11 蛋白浓度的测定 | 第81页 |
| 1.3.12 表达蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第81-82页 |
| 1.3.13 EpFAR在High Five昆虫细胞中的表达鉴定 | 第82-83页 |
| 1.3.14 EpFAR的亚细胞定位 | 第83页 |
| 1.3.15 白蜡虫EpFAR的酶活性与功能测定 | 第83-84页 |
| 2 结果与分析 | 第84-98页 |
| 2.1 重组杆状病毒穿梭载体的PCR验证结果 | 第84-85页 |
| 2.2 重组杆粒Bacmid DNA电泳结果 | 第85-86页 |
| 2.3 Sf9昆虫细胞被重组杆粒DNA转染后的症状 | 第86-90页 |
| 2.4 表达蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第90-91页 |
| 2.5 EpFAR在昆虫细胞High Five中的表达鉴定 | 第91页 |
| 2.6 EpFAR的亚细胞定位 | 第91-92页 |
| 2.6.1 EpFAR蛋白亚细胞定位分析 | 第91页 |
| 2.6.2 激光共聚焦观察EpFAR的定位 | 第91-92页 |
| 2.7 蛋白浓度标准曲线 | 第92-93页 |
| 2.8 粗蛋白浓度的测定结果 | 第93页 |
| 2.9 EpFAR的酶活性 | 第93-94页 |
| 2.10 EpFAR的反应条件 | 第94-98页 |
| 2.10.1 EpFAR反应的辅因子 | 第95页 |
| 2.10.2 EpFAR反应的温度 | 第95-96页 |
| 2.10.3 EpFAR反应的pH值 | 第96-97页 |
| 2.10.4 EpFAR对底物的选择性 | 第97-98页 |
| 3 讨论 | 第98-100页 |
| 4 小结 | 第100-102页 |
| 第六章 全文总结与讨论 | 第102-108页 |
| 1 总结 | 第102-103页 |
| 2 讨论 | 第103-106页 |
| 3 论文创新点 | 第106页 |
| 4 存在问题与展望 | 第106-108页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-122页 |
