| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-24页 |
| 1.1 木聚糖 | 第11-12页 |
| 1.1.1 木聚糖的结构 | 第11页 |
| 1.1.2 木聚糖的功能 | 第11-12页 |
| 1.2 木聚糖酶 | 第12-16页 |
| 1.2.1 木聚糖酶的来源 | 第12-13页 |
| 1.2.2 木聚糖酶的分类 | 第13页 |
| 1.2.3 木聚糖酶的结构、性质和底物特异性 | 第13-14页 |
| 1.2.4 木聚糖酶的催化机理 | 第14页 |
| 1.2.5 木聚糖酶的应用 | 第14-16页 |
| 1.2.5.1 木聚糖酶在食品工业领域的应用 | 第14-16页 |
| 1.2.5.2 木聚糖酶在饲料工业领域的应用 | 第16页 |
| 1.2.5.3 木聚糖酶在造纸工业领域的应用 | 第16页 |
| 1.3 木聚糖酶抑制蛋白 | 第16-24页 |
| 1.3.1 TAXI 型抑制蛋白 | 第18-19页 |
| 1.3.2 XIP 型抑制蛋白 | 第19-22页 |
| 1.3.3 TLXI 型抑制蛋白 | 第22页 |
| 1.3.4 木聚糖酶抑制蛋白在植物生长过程中的作用 | 第22-23页 |
| 1.3.5 木聚糖酶抑制蛋白对木聚糖酶应用领域的影响 | 第23-24页 |
| 1.3.5.1 淀粉-谷朊粉分离 | 第23-24页 |
| 1.3.5.2 面包烘焙 | 第24页 |
| 2 引言 | 第24-25页 |
| 3 材料与方法 | 第25-37页 |
| 3.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 3.1.1 工程菌株和载体 | 第25页 |
| 3.1.2 溶液和试剂 | 第25-26页 |
| 3.1.3 培养基 | 第26-27页 |
| 3.1.4 应用试验材料 | 第27页 |
| 3.1.5 实验仪器 | 第27页 |
| 3.2 实验流程 | 第27-28页 |
| 3.3 建模方法 | 第28页 |
| 3.4 突变体的获得及XIP-Ⅰ的纯化 | 第28-35页 |
| 3.4.1 SanPerep柱式质粒DNA小量抽提试剂盒提取重组质粒DNA | 第28页 |
| 3.4.2 聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因 | 第28-30页 |
| 3.4.3 PC产物的纯化与连接 | 第30-31页 |
| 3.4.4 重组质粒pET20b-Xyn1B模板的消解与转化 | 第31-32页 |
| 3.4.4.1 模板的消解 | 第31页 |
| 3.4.4.2 低温CaCl_2法制备感受态细胞 | 第31页 |
| 3.4.4.3 重组质粒的转化 | 第31-32页 |
| 3.4.5 木聚糖酶基因在E.coli BL21(DE3)中的表达及粗酶液制备 | 第32页 |
| 3.4.6 XIP-Ⅰ在毕赤酵母中的表达检测 | 第32-33页 |
| 3.4.7 蛋白的纯化 | 第33页 |
| 3.4.7.1 树脂的平衡 | 第33页 |
| 3.4.7.2 亲和层析与洗脱 | 第33页 |
| 3.4.7.3 超滤除盐 | 第33页 |
| 3.4.8 酶学性质分析 | 第33-35页 |
| 3.4.8.1 木聚糖酶活性测定 | 第33-34页 |
| 3.4.8.2 XIP-Ⅰ抑制活性的测定 | 第34页 |
| 3.4.8.3 最适温度的测定 | 第34页 |
| 3.4.8.4 最适pH的测定 | 第34页 |
| 3.4.8.5 温度稳定性的测定 | 第34页 |
| 3.4.8.6 pH稳定性的测定 | 第34-35页 |
| 3.4.8.7 酶促动力学参数的测定 | 第35页 |
| 3.5 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第35页 |
| 3.6 还原糖标准曲线的测定 | 第35-36页 |
| 3.7 蛋白标准曲线的测定 | 第36-37页 |
| 3.8 Xyn1B对麦芽汁制备过程中大麦芽糖化的影响 | 第37页 |
| 4 结果与分析 | 第37-52页 |
| 4.1 Neocallimastix sp.木聚糖酶Xyn1B的结构特征 | 第37-40页 |
| 4.1.1 Xyn1B的一级结构 | 第37-39页 |
| 4.1.2 Xyn1B的三级结构模拟 | 第39-40页 |
| 4.2 Xyn1B的thumb结构区域改造 | 第40-44页 |
| 4.2.1 Xyn1B的GGS、GGE、GSE、GTS突变体的重组质粒的构建 | 第40页 |
| 4.2.2 XIP-Ⅰ对突变体GGS、GGE、GSE、GTS抗抑制活性的检测 | 第40-42页 |
| 4.2.3 Xyn1B的Qing、TA突变体重组质粒的构建及表达、纯化 | 第42-43页 |
| 4.2.4 突变体Qing、TA的抗抑制活性的检测 | 第43-44页 |
| 4.3 palm结构区域的改造 | 第44-45页 |
| 4.3.1 Xyn1B的B3B4、B4B5突变体的重组质粒的构建及表达 | 第44-45页 |
| 4.3.2 突变体B3B4、B4B5抗抑制活性的检测 | 第45页 |
| 4.4 Xyn1B的活性位点区域的改造 | 第45-46页 |
| 4.5 Xyn1B与突变体酶学性质 | 第46-51页 |
| 4.5.1 Xyn1B与突变体酶的最适温度的测定 | 第46-47页 |
| 4.5.2 Xyn1B与突变体酶的最适pH的测定 | 第47-48页 |
| 4.5.3 Xyn1B与突变体酶的温度稳定性的测定 | 第48-49页 |
| 4.5.4 Xyn1B与突变体酶的pH稳定性的测定 | 第49-50页 |
| 4.5.5 Xyn1B与突变体酶的酶促动力学 | 第50-51页 |
| 4.6 抗抑制性木聚糖酶Xyn1B对麦芽糖化效果的影响 | 第51-52页 |
| 4.6.1 抗性酶Xyn1B对木糖释放量的影响 | 第51-52页 |
| 4.6.2 抗性酶Xyn1B对麦芽汁澄清度的影响 | 第52页 |
| 5 结论与讨论 | 第52-55页 |
| 5.1 结论 | 第52-53页 |
| 5.2 讨论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| Abstract | 第60-61页 |
| 附录 | 第62-67页 |
