| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第13-16页 |
| 第一章 H5N1 NS1 eIF4GI结合区缺失与野生毒感染CEF的蛋白质组学研究 | 第16-94页 |
| 1.前言 | 第16-44页 |
| 1.1 流感病毒 | 第16-30页 |
| 1.1.1 流感病毒的危害 | 第16-17页 |
| 1.1.2 流感病毒的分型及其宿主 | 第17-18页 |
| 1.1.3 流感病毒的结构 | 第18-19页 |
| 1.1.4 流感病毒编码的蛋白及其功能 | 第19-26页 |
| 1.1.5 流感病毒的生活周期 | 第26-28页 |
| 1.1.6 流感病毒的跨种传播 | 第28-30页 |
| 1.2 天然免疫 | 第30-39页 |
| 1.2.1 天然免疫信号通路 | 第31-36页 |
| 1.2.2 流感病毒与天然免疫 | 第36-39页 |
| 1.3 ANXA7蛋白及其功能 | 第39-42页 |
| 1.4 蛋白质组学研究 | 第42-43页 |
| 1.5 研究的目的与意义 | 第43-44页 |
| 2 材料与方法 | 第44-58页 |
| 2.1 材料 | 第44-47页 |
| 2.1.1 载体和菌株 | 第44页 |
| 2.1.2 细胞和病毒 | 第44页 |
| 2.1.3 试剂 | 第44-45页 |
| 2.1.4 抗体 | 第45页 |
| 2.1.5 si RNA合成 | 第45页 |
| 2.1.6 常用试剂的配制 | 第45-46页 |
| 2.1.7 双向电泳相关试剂的配制 | 第46-47页 |
| 2.1.8 主要实验仪器和设备 | 第47页 |
| 2.2 方法 | 第47-58页 |
| 2.2.1 CEF细胞的制作 | 第47-48页 |
| 2.2.2 细胞的冻存、复苏和培养 | 第48页 |
| 2.2.3 病毒感染 | 第48-49页 |
| 2.2.4 病毒蚀斑实验（PFU测定） | 第49页 |
| 2.2.5 双向凝胶电泳 | 第49-50页 |
| 2.2.6 银染 | 第50页 |
| 2.2.7 凝胶扫描和图像分析 | 第50页 |
| 2.2.8 表达差异蛋白点的检测 | 第50-51页 |
| 2.2.9 挖点 | 第51页 |
| 2.2.10 胶内酶解、质谱鉴定及生物信息学检索 | 第51页 |
| 2.2.11RNA的提取 | 第51页 |
| 2.2.12 反转录PCR（RT-PCR） | 第51-52页 |
| 2.2.13 实时荧光定量PCR（q RT-PCR） | 第52页 |
| 2.2.14 基因克隆及表达载体构建 | 第52-54页 |
| 2.2.15 转染 | 第54页 |
| 2.2.16 荧光素酶报告基因实验 | 第54-55页 |
| 2.2.17 Western blot及免疫共沉淀 | 第55-57页 |
| 2.2.18 间接免疫荧光（IFA） | 第57页 |
| 2.2.19 统计学处理 | 第57-58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-88页 |
| 3.1 rNS1-wt和rNS1-SD30毒株在CEF上的增殖能力比较 | 第58-59页 |
| 3.2 rNS1-wt和rNS1-SD30感染CEF的蛋白质组学分析 | 第59-60页 |
| 3.3 差异蛋白的质谱鉴定 | 第60-67页 |
| 3.4 IPA分析差异表达蛋白 | 第67-72页 |
| 3.5 Western blot验证差异表达蛋白 | 第72-73页 |
| 3.6 差异表达蛋白相对应的基因的构建与表达 | 第73页 |
| 3.7 差异蛋白过表达对rNS1-wt和rNS1-SD30增殖的影响 | 第73-77页 |
| 3.7.1 筛选对rNS1-wt和rNS1-SD30增殖有作用的差异蛋白 | 第73-74页 |
| 3.7.2 ANXA7抑制rNS1-SD30的增殖 | 第74-76页 |
| 3.7.3 ANXA7与NS1-wt及NS1-SD30不存在相互作用 | 第76-77页 |
| 3.8 差异蛋白过表达对ch MDA5诱导IFN-β 的影响 | 第77-82页 |
| 3.8.1 构建鸡RLR信号通路研究平台 | 第77-79页 |
| 3.8.2 筛选对ch MDA5诱导的IFN-β 启动子活性有作用的差异蛋白 | 第79页 |
| 3.8.3 ANXA7促进rNS1-SD30刺激产生的干扰素 | 第79-82页 |
| 3.9 ANXA7促进IFN-β 通过调节MDA5的表达水平 | 第82-88页 |
| 3.9.1 ANXA7促进poly I:C诱导的IFN-β 和ISG表达 | 第82-83页 |
| 3.9.2 ANXA7促进IFN-β 的产生靶向MDA5 | 第83-84页 |
| 3.9.3 ANXA7促进MDA5的蛋白和m RNA表达 | 第84-86页 |
| 3.9.4 ANXA7的C端促进MDA5诱导的IFN-β 表达 | 第86-87页 |
| 3.9.5 ANXA7与MDA5发生相互作用 | 第87-88页 |
| 4 讨论 | 第88-94页 |
| 4.1 病毒感染CEF的差异表达蛋白分析 | 第88-91页 |
| 4.2 ANXA7与天然免疫 | 第91-94页 |
| 第二章 HNRNPK调节流感病毒增殖通过参与NS1抑制的IFN-β 生成 | 第94-125页 |
| 1 前言 | 第94-101页 |
| 1.1 HNRNPK蛋白及其功能 | 第94-100页 |
| 1.1.1 HNRNPs家族蛋白 | 第94-97页 |
| 1.1.2 HNRNPK蛋白及其功能 | 第97-100页 |
| 1.2 研究的目的与意义 | 第100-101页 |
| 2 材料与方法 | 第101-103页 |
| 2.1 细胞 | 第101页 |
| 2.2 病毒 | 第101页 |
| 2.3 试剂 | 第101页 |
| 2.4 抗体 | 第101页 |
| 2.5 si RNA合成 | 第101页 |
| 2.6 表达质粒及突变体质粒构建 | 第101-103页 |
| 3 结果与分析 | 第103-121页 |
| 3.1 流感病毒感染下调HNRNPR的表达 | 第103-105页 |
| 3.1.1 流感病毒感染对HNRNPR的表达影响 | 第103-105页 |
| 3.1.2 流感病毒片段对HNRNPK表达的影响 | 第105页 |
| 3.2 HNRNPK促进多个亚型流感病毒的增殖 | 第105-108页 |
| 3.3 HNRNPK与NS1发生相互作用 | 第108-114页 |
| 3.3.1 HNRNPK与流感病毒蛋白的相互作用 | 第108页 |
| 3.3.2 HNRNPK与NS1发生相互作用 | 第108-110页 |
| 3.3.3 HNRNPK与NS1的互作不完全依赖于RNA | 第110-111页 |
| 3.3.4 HNRNPK与NS1发生互作的关键功能区域 | 第111-113页 |
| 3.3.5 HNRNPK的KH2和KNS是促进病毒的关键区域 | 第113-114页 |
| 3.4 HNRNPK抑制IFN产生 | 第114-119页 |
| 3.4.1 HNRNPK抑制流感病毒刺激的IFN-β 产生和IRF3的磷酸化 | 第114-115页 |
| 3.4.2 HNRNPK抑制Sev激活的IFN-β 启动子活性和IRF3的磷酸化 | 第115-116页 |
| 3.4.3 HNRNPK与TRAF3的相互作用 | 第116-119页 |
| 3.5 HNRNPK协同NS1抑制IRF3的磷酸化 | 第119页 |
| 3.6 HNRNPK促进NS1与TRAF3复合物的形成 | 第119-121页 |
| 4 讨论 | 第121-125页 |
| 总结 | 第125-126页 |
| 参考文献 | 第126-148页 |
| 附录 | 第148-160页 |
| 个人简介 | 第160-161页 |
| 致谢 | 第161-162页 |
