纳米抗体合成库的构建及其初步应用
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 1.实验材料、试剂与仪器 | 第15-25页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第15页 |
| 1.2 主要试剂配制 | 第15-22页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第22-25页 |
| 2.实验方法 | 第25-45页 |
| 2.1 纳米抗体合成库的构建 | 第25-30页 |
| 2.1.1 VHH抗体片段的合成 | 第25-27页 |
| 2.1.2 PAK100-VHH重组质粒的构建 | 第27-28页 |
| 2.1.3 电转化建立纳米抗体库 | 第28页 |
| 2.1.4 电转感受态的制备方法 | 第28-29页 |
| 2.1.5 质粒转化电转感受态的方法 | 第29页 |
| 2.1.6 乙醇沉淀 | 第29-30页 |
| 2.2 Taq DNA聚合酶的原核表达纯化 | 第30-36页 |
| 2.2.1 pET30-Taq重组质粒的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.2 pET30-Taq重组质粒诱导表达 | 第31-32页 |
| 2.2.3 菌液的超声裂解 | 第32页 |
| 2.2.4 Taq目的蛋白的纯化 | 第32-34页 |
| 2.2.5 蛋白的电泳检测 | 第34页 |
| 2.2.6 蛋白的透析 | 第34-35页 |
| 2.2.7 BCA蛋白浓度测定 | 第35页 |
| 2.2.8 Taq DNA聚合酶的活性测定 | 第35-36页 |
| 2.3 VCSM13辅助噬菌体的滴定与增殖 | 第36-37页 |
| 2.3.1 辅助噬菌体的滴定 | 第36页 |
| 2.3.2 辅助噬菌体的增殖 | 第36-37页 |
| 2.4 初始噬菌体文库的富集 | 第37-38页 |
| 2.5 纳米抗体的筛选方法 | 第38-40页 |
| 2.6 Taq DNA聚合酶纳米抗体的功能测定 | 第40-41页 |
| 2.7 制备待筛选克隆 | 第41页 |
| 2.8 ELISA检测克隆 | 第41-42页 |
| 2.9 菌液PCR检测克隆 | 第42-45页 |
| 3.实验结果 | 第45-55页 |
| 3.1 VHH抗体片段的合成 | 第45-46页 |
| 3.2 噬菌粒载体pAK100的处理 | 第46-47页 |
| 3.3 PAK100-VHH连接后的酶切鉴定 | 第47页 |
| 3.4 纳米抗体库库容的测定 | 第47页 |
| 3.5 pET30-Taq重组质粒的构建 | 第47-49页 |
| 3.6 Taq目标蛋白的表达纯化 | 第49页 |
| 3.7 Taq DNA聚合酶的活性测定 | 第49-50页 |
| 3.8 Taq DNA聚合酶纳米抗体的富集结果 | 第50-52页 |
| 3.9 Taq DNA聚合酶纳米抗体的功能检测 | 第52-53页 |
| 3.10 抗IgG纳米抗体的富集结果 | 第53-55页 |
| 讨论 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 综述 | 第63-73页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
