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OCILRP2调节TLR4信号通路对巨噬细胞功能的影响

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-7页
缩略词表第11-13页
引言第13-15页
1 试剂与设备第15-21页
    1.1 细胞系与主要试剂第15-16页
    1.2 仪器与设备第16-17页
    1.3 主要溶剂的配制第17-21页
2 方法第21-33页
    2.1 细胞培养和转染第21-22页
        2.1.1 细胞培养第21页
        2.1.2 细胞复苏第21页
        2.1.3 细胞冻存第21页
        2.1.4 细胞传代第21-22页
        2.1.5 细胞计数第22页
        2.1.6 细胞转染第22页
    2.2 敲低OCILRP2稳定株的筛选第22-24页
        2.2.1 构建OCILRP2shRNA慢病毒载体第22-23页
        2.2.2 慢病毒颗粒的制备第23页
        2.2.3 筛选嘌呤霉素的最佳浓度第23页
        2.2.4 慢病毒颗粒感染与细胞筛选第23-24页
    2.3 敲低OCILRP2的验证第24-27页
        2.3.1 Westernblot检测细胞中OCILRP2的蛋白表达第24-25页
        2.3.2 RT-qPCR检测细胞中OCILRP2的表达第25-27页
    2.4 细胞功能检测第27-30页
        2.4.1 细胞粘附能力的检测第27页
        2.4.2 细胞迁移能力的检测第27-28页
        2.4.3 细胞内吞能力的检测第28-29页
        2.4.4 细胞因子的检测第29页
        2.4.5 细胞NO分泌的检测第29-30页
    2.5 TLR4通路中相关蛋白的检测第30-32页
        2.5.1 信号通路中蛋白的检测第30页
        2.5.2 NF-?B的活性检测第30-31页
        2.5.3 NF-?B核转位的检测第31-32页
    2.6 统计学分析第32-33页
3 结果第33-43页
    3.1 沉默OCILRP2基因的验证第33页
    3.2 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞的粘附能力第33-34页
    3.3 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞的迁移能力第34-38页
        3.3.1 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞的划痕愈合能力第34-35页
        3.3.2 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞的迁移能力第35-36页
        3.3.3 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞的趋化能力第36-38页
    3.4 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞的内吞功能第38-39页
        3.4.1 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞的吞饮能力第38页
        3.4.2 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞的吞噬能力第38-39页
    3.5 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞炎性细胞因子的释放第39页
    3.6 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬细胞分泌NO及表达iNOS的能力第39-40页
    3.7 沉默OCILRP2不影响C-Raf、AKT、p44/42、p38的磷酸化水平第40-41页
    3.8 沉默OCILRP2下调TBK1、IRF3、TAK1、IκB-α、p65的磷酸化水平第41页
    3.9 沉默OCILRP2抑制巨噬细胞NF-?B的活化第41-42页
    3.10 沉默OCILRP2抑制巨噬细胞NF-?B核转位第42-43页
4 讨论第43-47页
5 结论第47-49页
参考文献第49-53页
综述第53-63页
    参考文献第57-63页
致谢第63-65页
攻读学位期间参加的学术会议及研究成果第65-66页

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