摘要 | 第4-7页 |
ABSTRACT | 第7-9页 |
英文缩略词表 | 第13-15页 |
前言 | 第15-19页 |
1.材料 | 第19-25页 |
1.1 主要材料试剂 | 第19-20页 |
1.2 试剂配制 | 第20-23页 |
1.3 仪器设备 | 第23-25页 |
2.实验方法 | 第25-39页 |
2.1 细胞培养 | 第25页 |
2.1.1 细胞培养 | 第25页 |
2.2 慢病毒感染实验 | 第25-26页 |
2.2.1 慢病毒包装 | 第25-26页 |
2.2.2 细胞感染慢病毒实验 | 第26页 |
2.3 细胞增殖实验 | 第26-27页 |
2.3.1 细胞生长曲线 | 第26页 |
2.3.2 CCK-8检测细胞增殖 | 第26-27页 |
2.4 分化实验 | 第27-33页 |
2.4.1 NGF诱导PC12细胞分化 | 第27页 |
2.4.2 对分化细胞拍照并计数 | 第27-28页 |
2.4.3 Westernblotting检测蛋白水平 | 第28-29页 |
2.4.4 RT-PCR | 第29-31页 |
2.4.5 RealTimePCR | 第31-32页 |
2.4.6 免疫荧光 | 第32-33页 |
2.5 GSTPULL-DOWN实验 | 第33-34页 |
2.5.1 原核诱导 | 第33页 |
2.5.2 GST纯化 | 第33页 |
2.5.3 PULL-DOWN | 第33-34页 |
2.6 基因组DNA的提取 | 第34页 |
2.7 CHIP实验 | 第34-39页 |
2.7.1 引物设计 | 第34-35页 |
2.7.2 预测转录因子结合位点的引物设计 | 第35-36页 |
2.7.3 ChIP实验 | 第36-39页 |
3.实验结果 | 第39-53页 |
3.1 GSTPULL-DOWN结果 | 第39-40页 |
3.1.1 pGEX-6p-1-PTEN和pGEX-6p-1诱导结果 | 第39页 |
3.1.2 GST-PTEN和GST的纯化结果 | 第39-40页 |
3.1.3 GSTpulldown-Westernblotting | 第40页 |
3.2 ERK5过表达或沉默稳定细胞株的建立 | 第40-41页 |
3.3 ERK5对PC12细胞增殖的影响 | 第41-43页 |
3.3.1 生长曲线实验结果 | 第41-42页 |
3.3.2 CCK-8实验结果 | 第42-43页 |
3.4 ERK5促进PC12细胞分化 | 第43-46页 |
3.4.1 ERK5促进PC12细胞突起增多 | 第43-44页 |
3.4.2 ERK5影响分化Marker表达水平 | 第44-46页 |
3.5 XMD8-92抑制PC12细胞分化 | 第46-50页 |
3.5.1 XMD8-92抑制ERK5活性 | 第46-47页 |
3.5.2 XMD8-92抑制PC12细胞突起 | 第47-48页 |
3.5.4 XMD8-92影响分化Marker表达水平的变化 | 第48-50页 |
3.6 ERK5过表达、沉默后对下游靶基因MRNA水平的影响 | 第50-51页 |
3.7 CHIP实验结果 | 第51-53页 |
4.讨论 | 第53-59页 |
5.结论 | 第59-61页 |
参考文献 | 第61-67页 |
综述 | 第67-77页 |
参考文献 | 第73-77页 |
致谢 | 第77-79页 |
攻读硕士期间发表的论文目录 | 第79-80页 |