| 摘要 | 第3-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 第1章 绪论 | 第18-26页 |
| 1.1 引言 | 第18页 |
| 1.2 水华微囊藻对浮游动物影响的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.2.1 蓝藻水华的成因、危害 | 第18-19页 |
| 1.2.2 水华微囊藻对浮游动物的影响 | 第19页 |
| 1.3 水华衍生物对浮游动物影响的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3.1 微囊藻毒素 | 第19-20页 |
| 1.3.2 非离子氨 | 第20页 |
| 1.3.3 亚硝酸盐 | 第20-21页 |
| 1.3.4 水华衍生物对浮游动物的影响 | 第21页 |
| 1.4 轮虫—潜在的毒理学研究模式动物 | 第21-23页 |
| 1.4.1 轮虫毒理学研究的生态学基础 | 第22-23页 |
| 1.4.2 轮虫毒理学研究的分子生物学基础 | 第23页 |
| 1.5 本文研究目的与意义 | 第23-26页 |
| 1.5.1 研究目的 | 第23页 |
| 1.5.2 研究意义 | 第23-24页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第24-25页 |
| 1.5.4 主要创新点 | 第25-26页 |
| 第2章 有毒、无毒铜绿微囊藻对萼花臂尾轮虫生活史和摄食的影响 | 第26-42页 |
| 2.1 引言 | 第26-27页 |
| 2.2 材料与方法 | 第27-31页 |
| 2.2.1 轮虫的培养 | 第27页 |
| 2.2.2 藻种来源与培养 | 第27-29页 |
| 2.2.3 实验设计 | 第29-30页 |
| 2.2.4 数据处理 | 第30-31页 |
| 2.2.5 统计分析 | 第31页 |
| 2.3 结果 | 第31-39页 |
| 2.3.1 轮虫生命表参数变化 | 第31-33页 |
| 2.3.2 轮虫生活史特征变化 | 第33-36页 |
| 2.3.3 摄食强度 | 第36-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-41页 |
| 2.4.1 微囊藻对轮虫生长的影响 | 第39-40页 |
| 2.4.2 微囊藻对轮虫生活史参数的影响 | 第40-41页 |
| 2.4.3 蓝藻—轮虫相互作用 | 第41页 |
| 2.5 本章小结 | 第41-42页 |
| 第3章 有毒、无毒铜绿微囊藻对萼花臂尾轮虫消化酶活性、抗氧化酶活性和营养含量的影响 | 第42-58页 |
| 3.1 引言 | 第42-43页 |
| 3.2 材料 | 第43-46页 |
| 3.2.1 培养和处理 | 第43-44页 |
| 3.2.2 实验设计 | 第44-46页 |
| 3.3 方法 | 第46-48页 |
| 3.3.1 生化指标测定 | 第46-48页 |
| 3.3.1.1 AMS测定 | 第46页 |
| 3.3.1.2 Pepsase测定 | 第46页 |
| 3.3.1.3 Trypsin测定 | 第46-47页 |
| 3.3.1.4 CL测定 | 第47页 |
| 3.3.1.5 SOD测定 | 第47页 |
| 3.3.1.6 CAT测定 | 第47页 |
| 3.3.1.7 GPx测定 | 第47页 |
| 3.3.1.8 Glycogen测定 | 第47页 |
| 3.3.1.9 Protein测定 | 第47页 |
| 3.3.1.10 TG测定 | 第47-48页 |
| 3.3.2 统计分析 | 第48页 |
| 3.4 结果 | 第48-55页 |
| 3.4.1 轮虫摄食率变化 | 第48-50页 |
| 3.4.2 不同藻类混合液对轮虫消化酶活性影响 | 第50-52页 |
| 3.4.3 不同藻类混合液对轮虫抗氧化酶活性影响 | 第52-53页 |
| 3.4.4 不同藻类混合液对轮虫营养含量影响 | 第53-55页 |
| 3.5 讨论 | 第55-57页 |
| 3.6 本章小结 | 第57-58页 |
| 第4章 藻毒素和氯化铵对萼花臂尾轮虫繁殖性能和表型特征的交互影响 | 第58-73页 |
| 4.1 引言 | 第58-59页 |
| 4.2 材料与方法 | 第59-61页 |
| 4.2.1 轮虫的培养 | 第59页 |
| 4.2.2 实验设计 | 第59-61页 |
| 4.2.3 统计分析 | 第61页 |
| 4.3 结果 | 第61-69页 |
| 4.3.1 生殖历时 | 第61-62页 |
| 4.3.1.1 繁殖前期 | 第61页 |
| 4.3.1.2 繁殖期 | 第61-62页 |
| 4.3.1.3 繁殖后期 | 第62页 |
| 4.3.2 每个雌体的总子代数 | 第62-65页 |
| 4.3.3 行为响应 | 第65-67页 |
| 4.3.4 表型特征 | 第67-69页 |
| 4.4 讨论 | 第69-72页 |
| 4.5 本章小结 | 第72-73页 |
| 第5章 藻毒素和氯化铵对萼花臂尾轮虫生命表参数和谷胱甘肽相关酶的影响 | 第73-97页 |
| 5.1 引言 | 第73-74页 |
| 5.2 材料和方法 | 第74-83页 |
| 5.2.1 轮虫的培养 | 第74页 |
| 5.2.2 实验设计 | 第74-75页 |
| 5.2.3 生化测定 | 第75-76页 |
| 5.2.3.1 ROS测定 | 第75-76页 |
| 5.2.3.2 Na~+/K~+ - ATPase测定 | 第76页 |
| 5.2.3.3 GSH测定 | 第76页 |
| 5.2.3.4 GPx测定 | 第76页 |
| 5.2.3.5 GR测定 | 第76页 |
| 5.2.3.6 GST测定 | 第76页 |
| 5.2.4 PHGPx基因RACE技术扩增全长 | 第76-83页 |
| 5.2.4.1 轮虫RNA提取(优化的TRlzol法) | 第76-77页 |
| 5.2.4.2 RNA质量、浓度确定 | 第77-78页 |
| 5.2.4.3 cDNA反转录合成 | 第78页 |
| 5.2.4.4 目的基因兼并引物设计 | 第78页 |
| 5.2.4.5 目的基因PCR扩增 | 第78-79页 |
| 5.2.4.6 目的基因PCR产物割胶回收 | 第79页 |
| 5.2.4.7 连接PMD~(TM)-19T载体 | 第79-80页 |
| 5.2.4.8 菌液PCR验证 | 第80页 |
| 5.2.4.9 测序比对 | 第80页 |
| 5.2.4.10 cDNA末端快速扩增基因全长 | 第80-82页 |
| 5.2.4.11 PHGPx基因荧光定量PCR | 第82-83页 |
| 5.2.5 统计分析 | 第83页 |
| 5.3 结果 | 第83-93页 |
| 5.3.1 轮虫生命表参数变化 | 第83-85页 |
| 5.3.2 ROS含量变化 | 第85页 |
| 5.3.3 Na~+/K~+ - ATPase活性变化 | 第85-88页 |
| 5.3.4 GSH相关酶活性变化 | 第88-90页 |
| 5.3.5 PHGPx基因序列分析、同源比对和三级结构预测 | 第90-93页 |
| 5.3.5.1 PHGPx cDNA序列分析 | 第90-91页 |
| 5.3.5.2 PHGPx进化树分析 | 第91-92页 |
| 5.3.5.3 PHGPx蛋白三级结构预测 | 第92-93页 |
| 5.3.6 PHGPx基因表达量变化 | 第93页 |
| 5.4 讨论 | 第93-96页 |
| 5.5 本章小结 | 第96-97页 |
| 第6章 藻毒素和亚硝酸盐不同温度下对萼花臂尾轮虫寿命和热休克响应的影响 | 第97-117页 |
| 6.1 引言 | 第97-98页 |
| 6.2 材料和方法 | 第98-100页 |
| 6.2.1 轮虫的培养 | 第98页 |
| 6.2.2 实验设计 | 第98-99页 |
| 6.2.3 ROS测定 | 第99页 |
| 6.2.4 hsp40、hsp60、hsp70和hsp90 mRNA表达水平测定 | 第99-100页 |
| 6.2.5 统计分析 | 第100页 |
| 6.3 结果 | 第100-114页 |
| 6.3.1 轮虫寿命变化 | 第100-102页 |
| 6.3.2 ROS含量变化 | 第102页 |
| 6.3.3 hsp40、hsp60、hsp70和hsp90 mRNA表达水平变化 | 第102-114页 |
| 6.4 讨论 | 第114-116页 |
| 6.5 本章小结 | 第116-117页 |
| 第7章 藻毒素和亚硝酸盐对萼花臂尾轮虫生长、脂质过氧化和抗氧化响应的联合效应 | 第117-137页 |
| 7.1 引言 | 第117-118页 |
| 7.2 材料与方法 | 第118-124页 |
| 7.2.1 轮虫的培养 | 第118页 |
| 7.2.2 实验设计 | 第118-119页 |
| 7.2.3 ROS、MDA含量和抗氧化酶活性测定 | 第119-120页 |
| 7.2.3.1 ROS测定 | 第120页 |
| 7.2.3.2 MDA测定 | 第120页 |
| 7.2.3.3 SOD测定 | 第120页 |
| 7.2.3.4 CAT测定 | 第120页 |
| 7.2.3.5 GSH测定 | 第120页 |
| 7.2.4 抗氧化酶基因mRNA表达水平测定 | 第120-121页 |
| 7.2.5 抗氧化蛋白体外原核表达和纯化 | 第121-123页 |
| 7.2.5.1 质粒转化至BL21 (DE3)感受态细胞 | 第121页 |
| 7.2.5.2 表达鉴定 | 第121页 |
| 7.2.5.3 表达优化 | 第121-122页 |
| 7.2.5.4 可溶性分析 | 第122页 |
| 7.2.5.5 放大表达与亲和纯化 | 第122页 |
| 7.2.5.6 Western Blot | 第122-123页 |
| 7.2.5.7 透析 | 第123页 |
| 7.2.6 不同温度、pH和变性剂下蛋白活性分析 | 第123-124页 |
| 7.2.7 统计分析 | 第124页 |
| 7.3 结果 | 第124-134页 |
| 7.3.1 生长、存活和繁殖性能变化 | 第124-126页 |
| 7.3.2 ROS和MDA含量变化 | 第126-128页 |
| 7.3.3 SOD、CAT和GSH含量变化 | 第128-129页 |
| 7.3.4 MnSOD、 CuZnSOD和CAT mRNA表达水平变化 | 第129-132页 |
| 7.3.5 MnSOD蛋白原核表达纯化和不同胁迫下的活性测定 | 第132-134页 |
| 7.4 讨论 | 第134-136页 |
| 7.5 本章小结 | 第136-137页 |
| 第8章 转录组水平上萼花臂尾轮虫响应有毒铜绿微囊藻的分子机理 | 第137-156页 |
| 8.1 引言 | 第137-138页 |
| 8.2 材料和方法 | 第138-141页 |
| 8.2.1 轮虫的培养 | 第138页 |
| 8.2.2 藻类的培养 | 第138页 |
| 8.2.3 实验设计 | 第138页 |
| 8.2.4 轮虫总RNA提取和转录组测序 | 第138-139页 |
| 8.2.5 测序原始数据处理 | 第139页 |
| 8.2.6 拼接结果的注释 | 第139页 |
| 8.2.7 基因表达量分析 | 第139页 |
| 8.2.8 COG分类 | 第139-140页 |
| 8.2.9 差异表达基因筛选 | 第140页 |
| 8.2.10 Gene Ontology功能显著性富集分析 | 第140页 |
| 8.2.11 Pathway显著性富集分析 | 第140页 |
| 8.2.12 差异表达基因的qPCR验证 | 第140-141页 |
| 8.3 结果 | 第141-153页 |
| 8.3.1 摄食有毒微囊藻和小球藻的轮虫种群生长率变化 | 第141页 |
| 8.3.2 萼花臂尾轮虫在不同培养条件下的RNA-seq | 第141-153页 |
| 8.3.2.1 测序数据质量评估 | 第141-142页 |
| 8.3.2.2 转录本测序的组装与拼接以及基因功能注释 | 第142-146页 |
| 8.3.2.3 差异表达基因分析 | 第146-153页 |
| 8.3.2.4 实时定量检测RNA-seq数据 | 第153页 |
| 8.4 讨论 | 第153-155页 |
| 8.5 本章小结 | 第155-156页 |
| 总结与展望 | 第156-158页 |
| 参考文献 | 第158-179页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第179-181页 |
| 致谢 | 第181页 |
