| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第1章 绪论 | 第8-23页 |
| 1.1 课题来源及研究的目的和意义 | 第8页 |
| 1.2 基因组印记概述 | 第8-9页 |
| 1.3 差异甲基化区域的调控 | 第9-11页 |
| 1.3.1 DNA甲基化简介 | 第9-10页 |
| 1.3.2 差异甲基化区域的生物学作用 | 第10-11页 |
| 1.4 DLK1-DIO3印记区域介绍 | 第11-15页 |
| 1.4.1 DLK1-DIO3印记区域概述 | 第11-12页 |
| 1.4.2 DLK1-DIO3印记区域主要元件与肿瘤发生的分析 | 第12-14页 |
| 1.4.3 已知差异甲基化区域的研究 | 第14-15页 |
| 1.5 MEG8-DMR的相关研究 | 第15-18页 |
| 1.5.1 MEG8-DMR的生物信息学分析 | 第15-16页 |
| 1.5.2 MEG8-DMR附近的插入突变与肝癌发生 | 第16-18页 |
| 1.5.3 MEG8-DMR关于胚胎发育的研究进展 | 第18页 |
| 1.6 CRISPR/Cas9技术的研究现状 | 第18-21页 |
| 1.6.1 CRISPR/Cas9基因编辑技术介绍 | 第18-20页 |
| 1.6.2 CRISPR/Cas9基因编辑技术应用 | 第20-21页 |
| 1.7 本研究内容及技术路线 | 第21-23页 |
| 1.7.1 本研究主要研究内容 | 第21-22页 |
| 1.7.2 本研究技术路线 | 第22-23页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第23-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 实验细胞系 | 第23页 |
| 2.1.2 实验菌株与载体 | 第23页 |
| 2.1.3 实验主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-35页 |
| 2.2.1 Cas9敲除载体的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.2 细胞水平实验 | 第26-27页 |
| 2.2.3 基因组DNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.4 基因组总RNA的提取及反转录 | 第28-29页 |
| 2.2.5 实时荧光定量PCR | 第29-30页 |
| 2.2.6 细胞增殖及克隆形成 | 第30-31页 |
| 2.2.7 细胞划痕与侵袭 | 第31-32页 |
| 2.2.8 细胞周期 | 第32-34页 |
| 2.2.9 细胞凋亡 | 第34页 |
| 2.2.10 统计学分析 | 第34-35页 |
| 第3章 MEG8-DMR对基因表达的调控 | 第35-42页 |
| 3.1 引言 | 第35页 |
| 3.2 构建Cas9-MEG8-DMR重组载体 | 第35-36页 |
| 3.2.1 sgRNA和检测引物的设计 | 第35页 |
| 3.2.2 构建Cas9-MEG8-DMR重组载体 | 第35-36页 |
| 3.3 在Huh7细胞中敲除MEG8-DMR | 第36-37页 |
| 3.4 MEG8-DMR与相关基因的表达调控 | 第37-40页 |
| 3.4.1 MEG8-DMR对父本表达基因表达水平的影响 | 第37-39页 |
| 3.4.2 MEG8-DMR对母本表达基因表达水平的影响 | 第39页 |
| 3.4.3 MEG8-DMR对miR-370表达水平的影响 | 第39-40页 |
| 3.5 讨论 | 第40-41页 |
| 3.6 本章小结 | 第41-42页 |
| 第4章 MEG8-DMR对Huh7细胞生物学行为的影响 | 第42-49页 |
| 4.1 引言 | 第42页 |
| 4.2 MEG8-DMR对Huh7细胞形态的影响 | 第42-43页 |
| 4.3 MEG8-DMR对Huh7细胞增殖和克隆形成能力的影响 | 第43-44页 |
| 4.4 MEG8-DMR对Huh7细胞迁移和侵袭能力的影响 | 第44页 |
| 4.5 MEG8-DMR对Huh7细胞周期的影响 | 第44-46页 |
| 4.6 MEG8-DMR对Huh7细胞凋亡能力的影响 | 第46-47页 |
| 4.7 讨论 | 第47-48页 |
| 4.8 本章小结 | 第48-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-60页 |
| 附录一 | 第60-61页 |
| 附录二 | 第61-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
