| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第1章 绪论 | 第8-21页 |
| 1.1 课题背景及研究的目的和意义 | 第8-9页 |
| 1.2 超级增强子研究进展 | 第9-16页 |
| 1.2.1 SEs的发现识别及作用机制 | 第9-11页 |
| 1.2.2 SEs与机体发育的关系 | 第11-12页 |
| 1.2.3 SEs与癌症的关系 | 第12-14页 |
| 1.2.4 SEs在癌症治疗中的作用 | 第14-15页 |
| 1.2.5 SEs与其他疾病的关系 | 第15-16页 |
| 1.3 EphA2及其基因家族的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.4 CRISPR/Cas9基因编辑技术简介 | 第18-19页 |
| 1.5 研究内容及技术路线 | 第19-21页 |
| 1.5.1 主要研究内容 | 第19-20页 |
| 1.5.2 主要研究技术路线 | 第20-21页 |
| 第2章 材料与方法 | 第21-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验载体及细胞系 | 第21页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.4 实验分析中的网站及软件 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-35页 |
| 2.2.1 总RNA的提取 | 第23页 |
| 2.2.2 mRNA定量PCR | 第23-25页 |
| 2.2.3 细胞培养及转染 | 第25-27页 |
| 2.2.4 细胞生物学特性实验 | 第27-28页 |
| 2.2.5 双荧光素酶报告基因检测 | 第28-29页 |
| 2.2.6 重组载体的构建、转化和克隆筛选 | 第29-32页 |
| 2.2.7 基因组DNA的提取 | 第32-34页 |
| 2.2.8 统计学分析 | 第34-35页 |
| 第3章 EphA2-SE活性的确定 | 第35-45页 |
| 3.1 引言 | 第35页 |
| 3.2 生物信息学筛选SES并预测靶基因 | 第35-37页 |
| 3.3 EphA2在人肿瘤细胞系内的表达分析 | 第37-38页 |
| 3.4 鉴定EphA2-SE的活性 | 第38-42页 |
| 3.4.1 EphA2-SE分段信息 | 第38-39页 |
| 3.4.2 双荧光报告系统检测E1、E2和E3增强子活性 | 第39-40页 |
| 3.4.3 EphA2-SE中E1分段信息 | 第40-41页 |
| 3.4.4 双荧光报告系统检测e1~e5增强子活性 | 第41-42页 |
| 3.5 讨论 | 第42-44页 |
| 3.6 本章小结 | 第44-45页 |
| 第4章 EphA2-SE对结肠癌细胞HCT-116生物学特性的影响 | 第45-54页 |
| 4.1 引言 | 第45页 |
| 4.2 CRISPR/Cas9-SE载体的构建及稳定转染细胞系的建立 | 第45-49页 |
| 4.2.1 EphA2-SE敲除载体的构建 | 第45-46页 |
| 4.2.2 CRIPSR/Cas9-SE载体转染效率和敲除能力的检测 | 第46-48页 |
| 4.2.3 CRISPR/Cas9-SE载体稳定转染细胞系的建立 | 第48-49页 |
| 4.3 EphA2-SE对HCT-116细胞生物学特性的影响 | 第49-51页 |
| 4.3.1 敲除EphA2-SE抑制HCT-116细胞增殖 | 第49-50页 |
| 4.3.2 敲除EphA2-SE抑制HCT-116细胞迁移 | 第50-51页 |
| 4.3.3 敲除EphA2-SE抑制HCT-116细胞克隆形成 | 第51页 |
| 4.4 讨论 | 第51-52页 |
| 4.5 本章小结 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
