| 致谢 | 第7-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 文献综述与立题依据 | 第18-43页 |
| 1.1 烟粉虱及其危害概述 | 第18-19页 |
| 1.1.1 烟粉虱 | 第18-19页 |
| 1.1.2 烟粉虱的危害 | 第19页 |
| 1.2 双生病毒及其危害概述 | 第19-24页 |
| 1.2.1 双生病毒 | 第19-21页 |
| 1.2.2 棉花曲叶病 | 第21-23页 |
| 1.2.3 番茄黄曲叶病 | 第23-24页 |
| 1.3 双生病毒的传播 | 第24-30页 |
| 1.3.1 介体昆虫对双生病毒的传播 | 第24-25页 |
| 1.3.2 烟粉虱对菜豆金黄花叶病毒属病毒的传播过程 | 第25-27页 |
| 1.3.3 影响烟粉虱传播菜豆金黄花叶病毒属病毒效率的因素 | 第27-28页 |
| 1.3.4 菜豆金黄花叶病毒属病毒编码蛋白在病毒传播中的作用 | 第28页 |
| 1.3.5 烟粉虱体内参与菜豆金黄花叶病毒属病毒传播的主要因子 | 第28-30页 |
| 1.4 互作蛋白的筛选与验证 | 第30-35页 |
| 1.4.1 酵母双杂交系统概述 | 第30-34页 |
| 1.4.2 蛋白互作的验证方法 | 第34-35页 |
| 1.5 胞吞作用及其在病毒侵染寄主或介体细胞时的作用 | 第35-41页 |
| 1.5.1 胞吞作用概述 | 第35-36页 |
| 1.5.2 胞吞作用在病毒侵染寄主或介体细胞时的作用 | 第36-37页 |
| 1.5.3 网格蛋白介导的胞吞作用 | 第37-41页 |
| 1.6 立题依据与研究内容 | 第41-43页 |
| 1.6.1 立题依据 | 第41-42页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第42-43页 |
| 2 基本材料与方法 | 第43-56页 |
| 2.1 基本材料 | 第43-47页 |
| 2.1.1 供试烟粉虱种群及其维持方法 | 第43页 |
| 2.1.2 供试植物 | 第43-44页 |
| 2.1.3 供试病毒与感毒植物获取 | 第44-45页 |
| 2.1.4 生态学试验相关主要仪器设备 | 第45-46页 |
| 2.1.5 生物化学与分子生物学相关研究主要设备与试剂 | 第46-47页 |
| 2.2 基本试验方法 | 第47-56页 |
| 2.2.1 烟粉虱总DNA的提取 | 第47-48页 |
| 2.2.2 烟粉虱隐存种的鉴定 | 第48-49页 |
| 2.2.3 烟粉虱解剖方法及各个组织总DNA的提取方法 | 第49-50页 |
| 2.2.4 植物和烟粉虱总DNA中的病毒DNA的PCR检测 | 第50页 |
| 2.2.5 定量PCR | 第50-51页 |
| 2.2.6 烟粉虱中肠与唾液腺主腺中病毒的免疫荧光检测 | 第51页 |
| 2.2.7 烟粉虱总RNA的提取与cDNA的获得 | 第51-52页 |
| 2.2.8 PCR与酶切产物的切胶回收 | 第52-53页 |
| 2.2.9 载体连接、转化、菌落PCR鉴定与质粒提取 | 第53-56页 |
| 3 不同烟粉虱隐存种对棉花曲叶病相关病毒的传播特异性及机制研究 | 第56-80页 |
| 3.1 材料与方法 | 第57-64页 |
| 3.1.1 供试昆虫、植物与病毒 | 第57页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第57页 |
| 3.1.3 植物总DNA的提取 | 第57-58页 |
| 3.1.4 烟粉虱隐存种对病毒传播效率的测定 | 第58页 |
| 3.1.5 烟粉虱整虫体内与蜜露中病毒量的分析 | 第58-59页 |
| 3.1.6 烟粉虱各个组织的解剖及总DNA的获得 | 第59页 |
| 3.1.7 烟粉虱中肠与唾液腺主腺中病毒的免疫荧光检测 | 第59页 |
| 3.1.8 突变病毒侵染性克隆的构建与病毒侵染植物的获得 | 第59-61页 |
| 3.1.9 菜豆金黄花叶病毒属病毒的外壳蛋白氨基酸序列的获取与系统进化分析 | 第61页 |
| 3.1.10 数据分析 | 第61-62页 |
| 3.1.11 本章实验所用引物 | 第62-64页 |
| 3.2 结果与分析 | 第64-77页 |
| 3.2.1 不同隐存种烟粉虱对CLCuMV的传播效率比较 | 第64-65页 |
| 3.2.2 MEAM1与AsiaⅡ1整虫与蜜露中病毒量的分析 | 第65-67页 |
| 3.2.3 MEAM1与AsiaⅡ1不同组织中病毒的检测与定量分析 | 第67-69页 |
| 3.2.4 MEAM1与AsiaⅡ1中肠与唾液腺主腺中病毒的免疫荧光检测 | 第69-70页 |
| 3.2.5 MED与AsiaⅡ1差异性传播木尔坦棉花曲叶病毒的机制研究 | 第70-72页 |
| 3.2.6 MEAM1获取外壳蛋白基因突变病毒后中肠与唾液腺主腺中病毒的免疫荧光检测 | 第72-74页 |
| 3.2.7 基于菜豆金黄花叶病毒属病毒外壳蛋白氨基酸序列的系统进化分析 | 第74-75页 |
| 3.2.8 MEAM1与AsiaⅡ1对烟草曲茎病毒的差异性传播 | 第75-77页 |
| 3.3 讨论 | 第77-80页 |
| 4 AsiaⅡ1体内与CLCuMV外壳蛋白互作的蛋白筛选与验证 | 第80-96页 |
| 4.1 材料与方法 | 第80-89页 |
| 4.1.1 供试昆虫、植物与病毒 | 第80页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第80页 |
| 4.1.3 AsiaⅡ1酵母双杂交cDNA文库的构建 | 第80-81页 |
| 4.1.4 诱饵载体pDHB1-CLCuMV-CP的构建 | 第81页 |
| 4.1.5 诱饵载体pDHB1-CLCuMV-CP转化酵母NMY51菌株 | 第81-82页 |
| 4.1.6 转化有诱饵载体pDHB1-CLCuMV-CP的酵母NMY51菌株总蛋白提取 | 第82页 |
| 4.1.7 Western blot及考马斯亮蓝法检测目的蛋白 | 第82-83页 |
| 4.1.8 pDHB1-CLCuMV-CP预筛库 | 第83-84页 |
| 4.1.9 pDHB1-CLCuMV-CP筛库 | 第84页 |
| 4.1.10 酵母质粒提取、转化大肠杆菌及菌落PCR | 第84页 |
| 4.1.11 互作验证 | 第84-85页 |
| 4.1.12 基因全长扩增、载体连接及其与CLCuMV-CP互作的验证 | 第85页 |
| 4.1.13 GST-Pull down | 第85-86页 |
| 4.1.14 本章实验所用引物 | 第86-89页 |
| 4.2 结果与分析 | 第89-93页 |
| 4.2.1 pDHB1-CLCuMV-CP在酵母NMY51菌株中的表达 | 第89页 |
| 4.2.2 pDHB1-CLCuMV-CP预筛库实验结果 | 第89-90页 |
| 4.2.3 pDHB1-CLCuMV-CP筛库结果 | 第90-91页 |
| 4.2.4 互作蛋白编码基因全长与CLCuMV-CP互作的验证 | 第91-93页 |
| 4.2.5 采用GST-pull down验证互作蛋白与CLCuMV-CP的互作 | 第93页 |
| 4.3 讨论 | 第93-96页 |
| 5 网格蛋白介导的胞吞作用在番茄黄曲叶病毒穿过烟粉虱中肠肠壁过程中的作用 | 第96-111页 |
| 5.1 材料与方法 | 第97-100页 |
| 5.1.1 供试植物,昆虫与病毒 | 第97页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第97页 |
| 5.1.3 dsRNA合成方法 | 第97-98页 |
| 5.1.4 抑制剂、dsRNA与抗体膜饲喂方法 | 第98-99页 |
| 5.1.5 烟粉虱总RNA提取,cDNA获得以及基因表达分析 | 第99页 |
| 5.1.6 带毒植物总DNA的提取与定量及烟粉虱对TYLCV的获取 | 第99-100页 |
| 5.1.7 烟粉虱整虫与组织总DNA的提取 | 第100页 |
| 5.1.8 烟粉虱中肠的TYLCV免疫荧光检测 | 第100页 |
| 5.1.9 烟粉虱传毒效率的测定及结果检测 | 第100页 |
| 5.1.10 数据分析 | 第100页 |
| 5.1.11 本章实验所用引物 | 第100页 |
| 5.2 结果与分析 | 第100-109页 |
| 5.2.1 饲喂网格蛋白介导的胞吞作用抑制剂对烟粉虱整虫、中肠及血淋巴中病毒量的影响 | 第100-105页 |
| 5.2.2 沉默网格蛋白重链基因对烟粉虱整虫、中肠与血淋巴中病毒量的影响 | 第105-106页 |
| 5.2.3 饲喂Rab5抗体对烟粉虱整虫、中肠和血淋巴中病毒量的影响 | 第106页 |
| 5.2.4 沉默Rab7基因对烟粉虱整虫、中肠与血淋巴中病毒量的影响 | 第106页 |
| 5.2.5 饲喂网格蛋白介导的胞吞作用的抑制剂对烟粉虱传播TYLCV的影响 | 第106-109页 |
| 5.3 讨论 | 第109-111页 |
| 6 总讨论 | 第111-114页 |
| 6.1 全文总结 | 第111-112页 |
| 6.2 本研究的特色与创新之处 | 第112-113页 |
| 6.3 本研究的不足之处以及值得继续研究的问题 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-129页 |
| 附录 | 第129-134页 |
| 个人简历 | 第134-135页 |
