| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 1 绪论 | 第19-53页 |
| 1.1 水稻黑条矮缩病毒研究进展 | 第19-28页 |
| 1.1.1 水稻黑条矮缩病毒的发生、病害症状及其传播介体 | 第19-21页 |
| 1.1.2 基因组结构及其编码蛋白功能 | 第21-24页 |
| 1.1.3 病毒在介体昆虫中的侵染循环 | 第24-28页 |
| 1.2 植物病毒与昆虫介体的互作 | 第28-44页 |
| 1.2.1 病毒传播决定因子及昆虫特异受体蛋白 | 第28-31页 |
| 1.2.1.1 非循回型传播病毒 | 第28-30页 |
| 1.2.1.2 循回型传播病毒 | 第30-31页 |
| 1.2.2 昆虫体内共生微生物参与病毒传播 | 第31-32页 |
| 1.2.3 病毒侵染与昆虫免疫 | 第32-34页 |
| 1.2.4 病毒侵染与细胞自噬 | 第34-42页 |
| 1.2.4.1 自噬建立 | 第34-35页 |
| 1.2.4.2 自噬相关基因与信号转导 | 第35-38页 |
| 1.2.4.3 病毒与自噬 | 第38-42页 |
| 1.2.5 转录组学研究病毒与昆虫互作 | 第42-43页 |
| 1.2.6 蛋白质组学筛选病毒与昆虫互作蛋白 | 第43-44页 |
| 1.3 支架蛋白RACK1研究进展 | 第44-53页 |
| 1.3.1 RACK1结构 | 第45-46页 |
| 1.3.2 与RACK1互作的蛋白网络 | 第46-47页 |
| 1.3.3 RACK1与激酶PKC | 第47-49页 |
| 1.3.4 RACK1调控核糖体翻译 | 第49页 |
| 1.3.5 RACK1与肿瘤 | 第49-50页 |
| 1.3.6 RACK1与免疫反应 | 第50-53页 |
| 2 实验材料与方法 | 第53-76页 |
| 2.1 实验材料 | 第53-54页 |
| 2.1.1 植物材料、飞虱 | 第53页 |
| 2.1.2 质粒、菌株、细胞、cDNA文库、生化试剂与抗体 | 第53-54页 |
| 2.1.3 仪器与设备 | 第54页 |
| 2.2 分子克隆方法 | 第54-61页 |
| 2.2.1 Trizol法抽提样品总RNA | 第54-55页 |
| 2.2.2 总RNA反转录 | 第55页 |
| 2.2.3 载体构建 | 第55-58页 |
| 2.2.3.1 PCR | 第55页 |
| 2.2.3.2 CaCl_2法感制备大肠杆菌感受态 | 第55-56页 |
| 2.2.3.3 载体连接和热激转化 | 第56页 |
| 2.2.3.4 DNA琼脂糖凝胶回收 | 第56-57页 |
| 2.2.3.5 质粒抽提 | 第57-58页 |
| 2.2.4 荧光定量PCR | 第58页 |
| 2.2.5 Western blot | 第58-60页 |
| 2.2.6 Northern blot | 第60-61页 |
| 2.3 互作蛋白质筛选与验证 | 第61-66页 |
| 2.3.1 酵母双杂交系统 | 第61-64页 |
| 2.3.1.1 酵母双杂交法筛库 | 第61-63页 |
| 2.3.1.2 酵母质粒的提取 | 第63页 |
| 2.3.1.3 质粒转化酵母菌株(LiAc法少量转化) | 第63-64页 |
| 2.3.1.4 酵母双杂交验证蛋白互作 | 第64页 |
| 2.3.2 免疫共沉淀(Co-IP)试验 | 第64-65页 |
| 2.3.3 GST pull-down试验 | 第65-66页 |
| 2.3.3.1 蛋白纯化 | 第65-66页 |
| 2.3.3.2 蛋白互作的GST pull-down验证 | 第66页 |
| 2.4 Sf9昆虫表达系统 | 第66-68页 |
| 2.4.1 重组杆状病毒的构建 | 第66-67页 |
| 2.4.2 细胞转染 | 第67-68页 |
| 2.4.3 共聚焦显微镜观察 | 第68页 |
| 2.4.4 膜悬浮实验 | 第68页 |
| 2.5 稻飞虱显微注射RNA干扰技术 | 第68-71页 |
| 2.5.1 dsRNA合成 | 第69-70页 |
| 2.5.2 琼脂糖胶台制作 | 第70页 |
| 2.5.3 注射后用于饲养飞虱的水稻罐制作 | 第70页 |
| 2.5.4 飞虱显微注射 | 第70-71页 |
| 2.5.5 注射后飞虱的饲养 | 第71页 |
| 2.5.6 RNAi效果分析 | 第71页 |
| 2.6 免疫组化 | 第71-73页 |
| 2.6.1 荧光素抗体的制备 | 第71-73页 |
| 2.6.1.1 抗体的纯化 | 第71-72页 |
| 2.6.1.2 荧光抗体的交联 | 第72-73页 |
| 2.6.2 免疫荧光检测 | 第73页 |
| 2.7 常温包埋样品制备以及电镜观察 | 第73-74页 |
| 2.8 蛋白激酶C活性检测 | 第74-76页 |
| 3 酵母双杂交技术筛选与RBSDV CP互作的灰飞虱介体因子 | 第76-85页 |
| 3.1 酵母毒性及其自激活活性检测 | 第76-77页 |
| 3.2 酵母双杂交实验筛选灰飞虱文库 | 第77-80页 |
| 3.3 酵母双杂交验证筛选结果 | 第80-82页 |
| 3.4 讨论 | 第82-85页 |
| 4 RBSDV CP与灰飞虱RACK1互作机理研究 | 第85-104页 |
| 4.1 RBSDV CP与LsRACK1互作验证 | 第85-91页 |
| 4.1.1 RBSDV CP与LsRACK1蛋白在体内外存在互作 | 第85-87页 |
| 4.1.2 LsRACK1序列特征 | 第87-89页 |
| 4.1.3 酵母双杂交实验鉴定最小互作结构域 | 第89-91页 |
| 4.2 RBSDV侵染对灰飞虱LsRACK1基因表达的影响 | 第91-92页 |
| 4.3 RBSDV CP改变LsRACK1亚细胞定位 | 第92-95页 |
| 4.3.1 RBSDV CP与LsRACK1在灰飞虱体内共定位 | 第92-93页 |
| 4.3.2 RBSDV CP与LsRACK1亚细胞定位观察 | 第93-95页 |
| 4.3.3 膜悬浮实验验证RBSDV CP改变LsRACK1的亚细胞定位 | 第95页 |
| 4.4 RBSDV带毒灰飞虱中蛋白激酶C活性减弱 | 第95-97页 |
| 4.5 Sf9细胞表达RBSDV CP导致蛋白激酶C活性减弱 | 第97-98页 |
| 4.6 PKC活性影响灰飞虱体内RBSDV的积累 | 第98-99页 |
| 4.7 LsRACK1对灰飞虱体内RBSDV积累的影响 | 第99-100页 |
| 4.9 讨论 | 第100-104页 |
| 5 RBSDV CP蛋白表达诱导细胞自噬 | 第104-117页 |
| 5.1 RBSDV在灰飞虱消化道的侵染过程 | 第104-106页 |
| 5.2 RBSDV感染引起灰飞虱自噬 | 第106-109页 |
| 5.3 自噬对RBSDV病毒在灰飞虱体内积累的影响 | 第109-111页 |
| 5.4 RBSDV CP在Sf9细胞中表达引起自噬 | 第111-113页 |
| 5.5 RBSDV CP与ATG3存在互作 | 第113-114页 |
| 5.6 讨论 | 第114-117页 |
| 全文小结 | 第117-119页 |
| 参考文献 | 第119-138页 |
| 附录Ⅰ 水稻条纹病毒(RSV)在水稻与本氏烟中的群体变异 | 第138-164页 |
| 6.1 文献综述 | 第138-141页 |
| 6.1.1 RSV病毒的发生流行 | 第138-139页 |
| 6.1.2 RSV编码蛋白功能研究 | 第139-140页 |
| 6.1.3 RSV变异研究 | 第140-141页 |
| 6.1.4 研究意义 | 第141页 |
| 6.2 材料与方法 | 第141-144页 |
| 6.2.1 材料 | 第141-142页 |
| 6.2.2 RSV病毒接种 | 第142-143页 |
| 6.2.2.1 水稻接种RSV | 第142页 |
| 6.2.2.2 本氏烟接种RSV | 第142-143页 |
| 6.2.3 病毒高通量测序cDNA文库的构建与测序 | 第143页 |
| 6.2.4 生物信息学分析 | 第143-144页 |
| 6.3 结果与分析 | 第144-156页 |
| 6.3.1 RSV接种水稻与本氏烟发病情况 | 第144-147页 |
| 6.3.2 水稻与本氏烟中RSV准种高通量测序 | 第147页 |
| 6.3.3 RSV群体变异分析 | 第147-156页 |
| 6.3.3.1 总SNP及InDel分析 | 第148-149页 |
| 6.3.3.2 碱基替换分析 | 第149-152页 |
| 6.3.3.3 插入缺失分析 | 第152-153页 |
| 6.3.3.4 非同义替换及移码分析 | 第153-156页 |
| 6.4 讨论 | 第156-158页 |
| 6.5 参考文献 | 第158-164页 |
| 附录Ⅱ 补充材料 | 第164-167页 |
| 附录Ⅲ 本论文所用引物汇总 | 第167-171页 |
| 附录Ⅳ 本论文所用术语缩写及中英文对照 | 第171-175页 |
| 附录Ⅴ 常用缓冲液和培养基配方 | 第175-181页 |
| 作者简历及攻读博士学位期间已发表论文 | 第181页 |
