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水稻叶片早衰基因OsFd-GOGAT和OsBBS1的功能研究

致谢第6-10页
缩略词表第10-11页
摘要第11-13页
ABSTRACT第13-15页
1 引言第16-18页
2 文献综述第18-35页
    2.1 叶片衰老的类型和生理变化第18-19页
        2.1.1 叶片衰老的类型及表现第18页
        2.1.2 叶片衰老的生理变化第18-19页
    2.2 水稻叶片衰老的影响因素第19-20页
        2.2.1 影响水稻叶片衰老的环境因素第19页
        2.2.2 影响水稻叶片衰老的栽培条件第19-20页
        2.2.3 影响水稻叶片衰老的自身因素第20页
    2.3 水稻叶片衰老的分子遗传机制第20-33页
        2.3.1 转录因子基因第23页
        2.3.2 叶绿体发育及叶绿素代谢相关基因第23-25页
        2.3.3 激素代谢相关基因第25页
        2.3.4 蛋白修饰相关基因第25-31页
        2.3.5 其他衰老相关基因第31-33页
    2.4 本研究的目的和意义第33-35页
3 材料与方法第35-48页
    3.1 水稻材料第35页
    3.2 叶片衰老相关生理学分析方法第35-37页
        3.2.1 水稻叶片叶绿素含量测定第35-36页
        3.2.2 水稻叶片光合速率测定第36页
        3.2.3 透射电镜观察第36页
        3.2.4 DAB染色检测过氧化氢含量第36页
        3.2.5 台盼蓝染色检测坏死细胞第36-37页
        3.2.6 NBT检测超氧阴离子第37页
    3.3 基因图位克隆程序第37-39页
        3.3.1 DNA提取方法第37页
        3.3.2 SSR及InDel分子标记分析方法第37-38页
        3.3.3 基因定位分析第38-39页
    3.4 水稻总RNA提取第39-40页
    3.5 OsFd-GOGAT的人工RNA干扰载体构建第40-41页
    3.6 通过CRISPR-Cas9敲除OsBBS1第41-42页
    3.7 OsBBS1过表达载体的构建第42-43页
    3.8 OsBBS1基因时空表达模式分析第43-44页
        3.8.1 OsBBS1启动子GUS融合载体构建第43-44页
        3.8.2 GUS染色及观察第44页
    3.9 水稻转基因操作程序第44-46页
        3.9.1 愈伤组织诱导及继代第44-45页
        3.9.2 水稻愈伤组织的侵染第45页
        3.9.3 共培养第45页
        3.9.4 抗性愈伤组织的选择第45页
        3.9.5 预分化第45-46页
        3.9.6 分化第46页
        3.9.7 生根第46页
    3.10 GOGAT酶活性检测第46-47页
    3.11 糙米蛋白质含量及叶片游离氨基酸含量测定第47页
    3.12 Real-time qPCR方法第47-48页
4 结果与分析第48-77页
    4.1 突变体的表型分析第48-56页
        4.1.1 gogat1表型分析第48-50页
        4.1.2 bbs1表型分析第50-56页
    4.2 早衰突变体的遗传分析和基因定位第56-60页
        4.2.1 gogat1遗传分析及基因定位第56-58页
        4.2.2 bbs1遗传分析及基因定位第58-60页
    4.3 突变蛋白及其同源蛋白分析第60-65页
        4.3.1 OsFd-GOGAT及其同源蛋白分析第60-64页
        4.3.2 OsBBS1蛋白及其同源蛋白分析第64-65页
    4.4 突变基因的功能验证第65-69页
        4.4.1 OsFd-GOGAT的功能验证第65-67页
        4.4.2 OsBBS1的功能验证第67-69页
    4.5 早衰基因的表达模式分析第69-71页
        4.5.1 OsFd-GOGAT基因表达模式分析第69-70页
        4.5.2 OsBBS1时空表达模式分析第70-71页
    4.6 灌浆期gogat1突变体游离氨基酸及氨代谢相关基因的表达分析第71-75页
    4.7 OsBBS1对盐胁迫的响应第75-77页
5 讨论第77-82页
    5.1 OsFd-GOGAT基因参与光呼吸过程中氨的重新吸收与衰老过程的氮代谢第77-80页
    5.2 OsBBS1基因参与叶片衰老与盐胁迫反应第80-82页
6 参考文献第82-97页
附录Ⅰ: 与博士论文研究有关的论文第97-98页
附录Ⅱ: 作者简介第98页

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