| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-16页 |
| 1.1 酵母细胞合成三磷酸胞苷 | 第8-9页 |
| 1.1.1 三磷酸胞苷的理化性质及生理功能 | 第8页 |
| 1.1.2 三磷酸胞苷的合成 | 第8-9页 |
| 1.2 细菌表面多糖 | 第9-10页 |
| 1.3 糖核苷酸的合成 | 第10-12页 |
| 1.3.1 唾液酸概述 | 第10-11页 |
| 1.3.2 糖核苷酸合成酶基因的克隆 | 第11页 |
| 1.3.3 CMP-Neu5Ac的合成 | 第11-12页 |
| 1.4 微生物表面展示 | 第12-13页 |
| 1.4.1 微生物表面展示概述 | 第12页 |
| 1.4.2 微生物表面展示种类 | 第12-13页 |
| 1.5 表面展示合成唾液酸化寡糖 | 第13-14页 |
| 1.5.1 唾液酸化寡糖的概述 | 第13-14页 |
| 1.5.2 唾液酸化寡糖的合成 | 第14页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第14-15页 |
| 1.7 研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-27页 |
| 2.1 材料 | 第16-17页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第16页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第16-17页 |
| 2.1.4 培养基 | 第17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-27页 |
| 2.2.1 抗生素的配制及工作浓度 | 第17页 |
| 2.2.2 葡萄糖的测定—3,5-二硝基水杨酸比色法 | 第17-18页 |
| 2.2.3 CTP合成反应初始条件建立及CTP的检测 | 第18页 |
| 2.2.4 重组表达质粒的构建 | 第18-20页 |
| 2.2.5 基因操作 | 第20-23页 |
| 2.2.6 大肠杆菌高效感受态细胞制备 | 第23页 |
| 2.2.7 大肠杆菌的转化 | 第23-24页 |
| 2.2.8 氯化锂化转化酿酒酵母EBY | 第24页 |
| 2.2.9 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第24-25页 |
| 2.2.10 重组菌株E.coliBL21(DE3)-pFLAG/pET28a-neuA诱导产酶培养条件及粗酶液的获得 | 第25-26页 |
| 2.2.11 重组菌株EBY100-pYD1-ST23诱导产酶培养条件 | 第26页 |
| 2.2.12 CMP-Neu5Ac含量及其合成酶酶活的确定 | 第26页 |
| 2.2.13 α-2,3-唾液酸化寡糖的TLC检测 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-40页 |
| 3.1 CTP的高效合成及优化 | 第27-30页 |
| 3.1.1 酵母细胞的筛选 | 第27-28页 |
| 3.1.2 CTP合成条件的优化 | 第28-30页 |
| 3.2 CMP-Neu5Ac的合成 | 第30-36页 |
| 3.2.1 重组表达质粒pFLAG/pET28a-neuA的验证 | 第30-31页 |
| 3.2.2 CMP-Neu5Ac合成酶NeuA的表达、鉴定及酶活比较 | 第31-33页 |
| 3.2.3 CMP-Neu5Ac合成酶发酵条件的优化 | 第33-34页 |
| 3.2.4 CMP-Neu5Ac的酶法合成条件优化 | 第34-36页 |
| 3.3 唾液酸化寡糖的合成 | 第36-40页 |
| 3.3.1 表面展示重组质粒pYD1-ST23的构建及验证 | 第36-37页 |
| 3.3.2 重组菌株EBY100-pYD1-ST23的筛选 | 第37-38页 |
| 3.3.3 唾液酸化寡糖的检测 | 第38-40页 |
| 主要结论与展望 | 第40-42页 |
| 主要结论 | 第40页 |
| 展望 | 第40-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第48页 |
