| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-21页 |
| 1.1 伪狂犬病病毒 | 第13-19页 |
| 1.1.1 概述 | 第13页 |
| 1.1.2 病毒粒子形态学 | 第13页 |
| 1.1.3 伪狂犬病毒的基因组结构 | 第13-14页 |
| 1.1.4 伪狂犬病毒的结构蛋白及其功能 | 第14-16页 |
| 1.1.5 疱疹病毒被膜蛋白的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.1.6 流行病学 | 第17-19页 |
| 1.2 免疫电镜研究方法 | 第19-20页 |
| 1.3 本研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 UL49、UL48和UL37基因的克隆及表达 | 第21-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 细胞、质粒和毒株 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21页 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-30页 |
| 2.2.1 引物设计及合成 | 第22-23页 |
| 2.2.2 PRV全基因的提取 | 第23页 |
| 2.2.3 UL49、UL48和UL37基因的PCR扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.4 UL49、UL48和UL37基因真核表达载体的构建 | 第24-27页 |
| 2.2.5 UL48和UL37原核表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.6 VP16和pUL37蛋白的诱导表达 | 第28-29页 |
| 2.2.7 VP16和pUL37蛋白的纯化 | 第29-30页 |
| 2.3 实验结果 | 第30-33页 |
| 2.3.1 UL49、UL48和UL37基因的扩增 | 第30页 |
| 2.3.2 真核重组质粒的双酶切鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.3 IFA鉴定真核重组质粒在细胞内的表达 | 第31-32页 |
| 2.3.4 原核重组质粒pET-28a-UL48/UL37的双酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.5 原核蛋白Vp16和pUL37的诱导表达 | 第33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 VP22、VP16、pUL37蛋白单克隆抗体的制备及单抗特性的鉴定 | 第35-49页 |
| 3.1 实验材料 | 第35页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第35页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第35页 |
| 3.1.3 主要溶液的配制 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-40页 |
| 3.2.1 病毒培养与纯化 | 第35-36页 |
| 3.2.2 间接ELISA方法的建立 | 第36页 |
| 3.2.3 小鼠免疫 | 第36页 |
| 3.2.4 SP2/0细胞的复苏 | 第36页 |
| 3.2.5 饲养层细胞及脾细胞的制备 | 第36-37页 |
| 3.2.6 阳性杂交瘤细胞的筛选与克隆 | 第37-38页 |
| 3.2.7 阳性杂交瘤细胞的冻存 | 第38页 |
| 3.2.8 单克隆抗体腹水的制备 | 第38页 |
| 3.2.9 间接ELISA检测杂交瘤细胞的稳定性 | 第38页 |
| 3.2.10 间接ELISA检测抗体效价 | 第38-39页 |
| 3.2.11 VP22、VP16和pUL37单抗的Western-blot鉴定 | 第39页 |
| 3.2.12 单克隆抗体亚类的鉴定 | 第39页 |
| 3.2.13 VP22、VP16和pUL37单抗的IFA鉴定 | 第39页 |
| 3.2.14 染色体计数试验 | 第39-40页 |
| 3.3 实验结果 | 第40-46页 |
| 3.3.1 间接ELISA方法的建立 | 第40页 |
| 3.3.2 细胞融合观察 | 第40-41页 |
| 3.3.3 阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第41页 |
| 3.3.4 间接ELISA检测杂交瘤细胞的稳定性 | 第41-42页 |
| 3.3.5 单克隆抗体亚类的鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3.6 ELISA检测抗体效价 | 第43-44页 |
| 3.3.7 Western-blot鉴定单克隆抗体的特异性 | 第44-45页 |
| 3.3.8 IFA鉴定单克隆抗体的特异性 | 第45页 |
| 3.3.9 杂交瘤细胞染色体数的检测 | 第45-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-49页 |
| 第四章 免疫电镜方法的建立 | 第49-59页 |
| 4.1 实验材料 | 第49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-50页 |
| 4.2.1 PRVHLJ-2013病毒毒价的测定 | 第49页 |
| 4.2.2 免疫条件的优化 | 第49-50页 |
| 4.2.3 免疫样品的制备 | 第50页 |
| 4.3 实验结果 | 第50-57页 |
| 4.3.1 PRVHLJ-2013株病毒滴度的测定 | 第50-51页 |
| 4.3.2 细胞病变时间的筛选 | 第51-52页 |
| 4.3.3 一抗的筛选 | 第52-55页 |
| 4.3.4 一抗稀释倍数的优化 | 第55-57页 |
| 4.4 讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 全文结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |
