| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-27页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征病概述 | 第15页 |
| 1.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒概述 | 第15-19页 |
| 1.2.1 PRRSV基因组结构 | 第15-16页 |
| 1.2.2 PRRSV基因组复制与亚基因组转录 | 第16-17页 |
| 1.2.3 PRRSV编码的非结构蛋白与结构蛋白功能 | 第17-18页 |
| 1.2.4 PRRSV的细胞嗜性 | 第18页 |
| 1.2.5 PRRSV的细胞生命活动周期 | 第18-19页 |
| 1.3 PCSK9的研究进展 | 第19-24页 |
| 1.3.1 PCSK9的结构及功能特点 | 第20页 |
| 1.3.2 PCSK9的成熟过程 | 第20-21页 |
| 1.3.3 PCSK9的转录调节 | 第21页 |
| 1.3.4 PCSK9与胆固醇代谢的关系 | 第21-22页 |
| 1.3.5 PCSK9抑制剂的研究 | 第22-23页 |
| 1.3.6 PCSK9在细胞凋亡方面的研究 | 第23-24页 |
| 1.3.7 PCSK9在炎症免疫方面的研究 | 第24页 |
| 1.3.8 PCSK9在病毒方面的研究 | 第24页 |
| 1.4 胆固醇运输机制 | 第24-26页 |
| 1.4.1 胆固醇运输的载体—脂蛋白颗粒的简介 | 第24-25页 |
| 1.4.2 胆固醇的合成及代谢 | 第25-26页 |
| 1.4.3 HDL与LDL交换反应过程 | 第26页 |
| 1.4.4 LDL与LDLR结合释放胆固醇的机制 | 第26页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二章 PRRSV强弱毒差异膜蛋白的筛选及验证 | 第27-38页 |
| 2.1 材料与方法 | 第27-29页 |
| 2.1.1 病毒和细胞 | 第27页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第27页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第27页 |
| 2.1.4 肺泡巨噬细胞的分离和培养 | 第27-28页 |
| 2.1.5 PRRSV感染PAM | 第28页 |
| 2.1.6 流式细胞术分选PAM | 第28页 |
| 2.1.7 膜蛋白样品的制备 | 第28页 |
| 2.1.8 FASP酶解 | 第28页 |
| 2.1.9 LC-MSMS质谱分析 | 第28-29页 |
| 2.1.10 质谱数据分析 | 第29页 |
| 2.1.11 生物信息学分析 | 第29页 |
| 2.2 结果 | 第29-35页 |
| 2.2.1 PAM的病毒感染 | 第29页 |
| 2.2.2 Shotgun定性质谱分析结果 | 第29-33页 |
| 2.2.3 PAM差异膜蛋白对PRRSV复制的影响 | 第33-35页 |
| 2.3 讨论 | 第35-38页 |
| 2.3.1 HP-PRRSV强弱毒差异比较的意义 | 第35页 |
| 2.3.2 从膜蛋白方面探究PRRSV致病机制的可行性分析及意义 | 第35-36页 |
| 2.3.3 部分差异膜蛋白的筛选及功能分析 | 第36页 |
| 2.3.4 载脂蛋白与PRRSV细胞嗜性的关系的探讨 | 第36页 |
| 2.3.5 本研究中样品处理的优势之处 | 第36-38页 |
| 第三章 PCSK9抑制PRRSV复制的作用阶段探究 | 第38-50页 |
| 3.1 材料与方法 | 第38-43页 |
| 3.1.1 病毒和细胞 | 第38页 |
| 3.1.2 主要抗体 | 第38页 |
| 3.1.3 主要酶和试剂 | 第38页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第38页 |
| 3.1.5 pCAGGS-PCSK9-Flag的构建 | 第38-40页 |
| 3.1.6 细胞内病毒RNA的提取 | 第40-41页 |
| 3.1.7 细胞上清中病毒RNA的提取 | 第41页 |
| 3.1.8 细胞内蛋白的提取 | 第41页 |
| 3.1.9 SDS-PAGE电泳及Westernblot | 第41-42页 |
| 3.1.10 间接免疫荧光(IFA) | 第42页 |
| 3.1.11 SYBR检测相关基因的mRNA表达水平 | 第42-43页 |
| 3.2 结果 | 第43-47页 |
| 3.2.1 pCAGGS-PCSK9的鉴定 | 第43页 |
| 3.2.2 PCSK9抑制北美型PRRSV强弱毒株的复制 | 第43-44页 |
| 3.2.3 PCSK9对强毒HuN4的抑制程度高于弱毒HuN4-F | 第44-45页 |
| 3.2.4 PCSK9能抑制欧洲型PRRSV毒株的复制 | 第45-46页 |
| 3.2.5 PCSK9对病毒的吸附过程没有影响 | 第46页 |
| 3.2.6 PCSK9对病毒的进入过程没有影响 | 第46-47页 |
| 3.2.7 PCSK9对病毒的抑制作用发生在病毒进入后的阶段 | 第47页 |
| 3.3 讨论 | 第47-50页 |
| 3.3.1 PCSK9抑制PRRSV复制的结果分析 | 第48页 |
| 3.3.2 差异膜蛋白PCSK9很可能与强弱毒感染效率差异有关 | 第48页 |
| 3.3.3 PCSK9很可能通过影响细胞的胆固醇摄入过程影响PRRSV复制 | 第48-50页 |
| 第四章 PCSK9抑制PRRSV复制机制的初步研究 | 第50-61页 |
| 4.1 材料与方法 | 第50-51页 |
| 4.1.1 病毒和细胞 | 第50页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第50页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第50页 |
| 4.1.4 免疫共沉淀(Co-IP) | 第50页 |
| 4.1.5 激光共聚焦 | 第50-51页 |
| 4.2 结果 | 第51-59页 |
| 4.2.1 内源性PCSK9含量与病毒的感染剂量有关 | 第51页 |
| 4.2.2 内源性PCSK9含量与病毒的感染时间有关 | 第51-52页 |
| 4.2.3 PRRSV可通过泛素蛋白体途径降解PCSK | 第52-53页 |
| 4.2.4 PCSK9对病毒的抑制作用与泛素蛋白酶体途径有关 | 第53-54页 |
| 4.2.5 PCSK9对PRRSV受体mRNA水平影响不显著 | 第54-55页 |
| 4.2.6 PCSK9不影响AnnexinA2含量的变化 | 第55页 |
| 4.2.7 PCSK9能够与LDLR互作 | 第55-56页 |
| 4.2.8 LDLR能抑制PRRSV复制 | 第56页 |
| 4.2.9 PCSK9可与PRRSV受体CD163互作 | 第56-57页 |
| 4.2.10 PCSK9可与PRRSV受体CD163共定位 | 第57-58页 |
| 4.2.11 PCSK9蛋白可通过泛素蛋白酶体途径降解CD163蛋白 | 第58-59页 |
| 4.3 讨论 | 第59-61页 |
| 4.3.1 PCSK9在PRRSV感染过程中的角色 | 第59页 |
| 4.3.2 PCSK9、AnnexinA2与PRRSV感染间关系的探讨 | 第59页 |
| 4.3.3 LDLR抑制PRRSV复制机制的探讨 | 第59-60页 |
| 4.3.4 PRRSV、PCSK9、CD163、泛素蛋白酶体间关系的探讨 | 第60-61页 |
| 第五章 全文结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-71页 |
| 附录 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 作者简历 | 第75页 |
