| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 英文縮略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-22页 |
| 1.1 AIV概述 | 第12-17页 |
| 1.1.1 AIV的组成结构 | 第12-13页 |
| 1.1.2 AIV各基因编码蛋白的结构及其功能 | 第13-17页 |
| 1.2 AIV的诊断方法 | 第17-19页 |
| 1.2.1 AIV传统检测方法 | 第17页 |
| 1.2.2 分子生物学检测方法 | 第17-19页 |
| 1.3 BAC-To-BAC杆状病毒表达系统 | 第19-20页 |
| 1.4 H7N9亚型AIV概况 | 第20页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 N3-N9亚型AIV神经氨酸酶蛋白的表达 | 第22-34页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 各亚型NA目的基因 | 第22页 |
| 2.1.2 主要载体和菌株 | 第22页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.1.5 主要溶液配制方法 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 N3-N9引物序列 | 第24页 |
| 2.2.2 N3-N9目的基因的扩增 | 第24-25页 |
| 2.2.3 杆状病毒转移载体的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.4 杆状病毒穿梭载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.5 N3-N9亚型NA蛋白的表达 | 第27-28页 |
| 2.3 结果 | 第28-32页 |
| 2.3.1 NA目的基因的扩增 | 第28-29页 |
| 2.3.2 杆状病毒转移载体的构建 | 第29页 |
| 2.3.3 杆状病毒穿梭载体的PCR验证 | 第29-30页 |
| 2.3.4 激光共聚焦 | 第30-31页 |
| 2.3.5 重组蛋白的western blot鉴定 | 第31页 |
| 2.3.6 N3-N9亚型NA神精氨酸酶活性实验 | 第31-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-34页 |
| 2.4.1 NA蛋白 | 第32页 |
| 2.4.2 利用杆状病毒表达系统表达AIV各蛋白的研究进展 | 第32页 |
| 2.4.3 杆状病毒表达系统表达NA蛋白的优势 | 第32-33页 |
| 2.4.4 试验用感受态细胞的制备方法 | 第33页 |
| 2.4.5 利用SDS-PAGE和western blot对目的蛋白的检测 | 第33-34页 |
| 第三章 H7N9亚型AIV RT-PCR检测方法的建立 | 第34-39页 |
| 3.1 试验材料 | 第34-35页 |
| 3.1.1 主要毒株 | 第34页 |
| 3.1.2 引物 | 第34-35页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第35页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-36页 |
| 3.2.1 样品的处理 | 第35页 |
| 3.2.2 总RNA的提取 | 第35页 |
| 3.2.3 一步法RT-PCR扩增 | 第35页 |
| 3.2.4 敏感性试验 | 第35-36页 |
| 3.2.5 特异性试验 | 第36页 |
| 3.2.6 与荧光定量RT-PCR的比较实验 | 第36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-38页 |
| 3.3.1 敏感性试验结果 | 第36-37页 |
| 3.3.2 特异性试验结果 | 第37页 |
| 3.3.3 与荧光定量RT-PCR的比较实验 | 第37-38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 全文结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 作者简历 | 第48页 |
