| 缩略词对照表 | 第4-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Summary | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-26页 |
| 1 羊口疮病毒的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.1 病原学与基因组 | 第15-16页 |
| 1.2 羊口疮流行病学 | 第16页 |
| 1.3 羊口疮诊断方法 | 第16-17页 |
| 1.3.1 免疫电镜观察 | 第16-17页 |
| 1.3.2 病毒分离鉴定 | 第17页 |
| 1.3.3 血清学检测 | 第17页 |
| 1.3.4 分子生物等检测方法 | 第17页 |
| 1.4 抗病毒免疫和免疫逃避 | 第17-19页 |
| 2 树突状细胞的研究进展 | 第19-22页 |
| 2.1 树突状细胞的分类 | 第19-20页 |
| 2.2 树突状细胞的功能 | 第20-21页 |
| 2.2.1 DCs的抗原摄取加工与提呈 | 第20页 |
| 2.2.2 DCs参与调节B细胞功能 | 第20-21页 |
| 2.2.3 DCs与T细胞的极化 | 第21页 |
| 2.2.4 DCs介导的固有免疫应答 | 第21页 |
| 2.3 树突状细胞的临床应用 | 第21-22页 |
| 3 蛋白质组学技术的发展概述 | 第22-25页 |
| 3.1 定量蛋白质组学的主要研究技术 | 第22-23页 |
| 3.2 iTRAQ技术的原理及操作流程 | 第23-24页 |
| 3.3 iTRAQ技术与其他技术的比较 | 第24页 |
| 3.4 iTRAQ技术在动物病毒研究中的应用 | 第24-25页 |
| 4 研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第二章 羊口疮病毒ORFV129蛋白多克隆抗体的制备 | 第26-38页 |
| 1 材料 | 第26-28页 |
| 1.1 毒株、细胞、实验动物 | 第26页 |
| 1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 1.3 主要仪器 | 第27页 |
| 1.4 主要的溶液配制 | 第27-28页 |
| 2 方法 | 第28-30页 |
| 2.1 基因引物的设计 | 第28页 |
| 2.2 ORFV129基因的扩增 | 第28页 |
| 2.3 pET-28a(+)-ORFV129重组质粒的构建与鉴定 | 第28页 |
| 2.4 诱导pET-28a(+)-ORFV129重组菌的表达 | 第28-29页 |
| 2.5 重组表达蛋白的可溶性分析 | 第29页 |
| 2.6 重组蛋白纯化 | 第29页 |
| 2.7 重组蛋白WesternBlot鉴定 | 第29页 |
| 2.8 多克隆抗体的准备 | 第29-30页 |
| 2.9 多克隆抗体效价的检测 | 第30页 |
| 2.10 多克隆抗体的间接免疫荧光检测 | 第30页 |
| 3 结果 | 第30-36页 |
| 3.1 ORFV129基因片段的扩增 | 第30-31页 |
| 3.2 重组质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| 3.3 重组表达菌的小量诱导表达 | 第32页 |
| 3.4 重组蛋白的可溶性分析 | 第32-33页 |
| 3.5 重组蛋白的纯化诱导 | 第33-34页 |
| 3.6 重组蛋白的Wester-Blot分析 | 第34-35页 |
| 3.7 采用间接ELISA法检测制备的兔源ORFV129多克隆抗体的效价 | 第35页 |
| 3.8 蛋白多抗的鉴定 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 羊口疮病毒对鼠骨髓DCs分化成熟的影响及免疫学效应 | 第38-54页 |
| 1 材料 | 第38-39页 |
| 1.1 细胞与实验动物 | 第38页 |
| 1.2 试剂 | 第38-39页 |
| 1.3 仪器 | 第39页 |
| 1.4 主要溶液配置 | 第39页 |
| 2 实验方法 | 第39-42页 |
| 2.1 ORFV滴度测定(TCID50) | 第39页 |
| 2.2 小鼠骨髓来源DCs体外诱导及培养 | 第39-40页 |
| 2.3 间接免疫荧光检测ORFV病毒对DCs的感染 | 第40页 |
| 2.4 ORFV对DCs表型的影响 | 第40-41页 |
| 2.5 ORFV对DCs分泌细胞因子的影响 | 第41页 |
| 2.6 ORFV对DCs吞噬能力的影响 | 第41页 |
| 2.7 ORFV对DCs刺激T细胞增殖能力的影响 | 第41-42页 |
| 2.7.1 T细胞的制备 | 第41页 |
| 2.7.2 刺激细胞的制备 | 第41-42页 |
| 2.7.3 DCs与T淋巴细胞的混合培养 | 第42页 |
| 2.8 实验数据分析 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-52页 |
| 3.1 TCID | 第42-43页 |
| 3.2 小鼠骨髓来源DCs体外诱导及培养 | 第43-44页 |
| 3.3 间接免疫荧光验证 | 第44-45页 |
| 3.4 ORFV对CD11C+细胞比例的影响 | 第45-47页 |
| 3.5 ORFV对DC成熟及细胞因子表达的影响 | 第47-50页 |
| 3.6 ORFV对DCs吞噬能力的影响 | 第50-52页 |
| 3.7 ORFV对DCs刺激T细胞增殖活化的影响 | 第52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 羊口疮病毒感染DCs蛋白质组学变化及其功能分析 | 第54-69页 |
| 1 材料 | 第54-55页 |
| 1.1 细胞、血清 | 第54页 |
| 1.2 实验试剂 | 第54-55页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第55页 |
| 1.4 溶液配制 | 第55页 |
| 2 方法 | 第55-59页 |
| 2.1 细胞的培养 | 第55页 |
| 2.2 感染细胞样品的准备 | 第55-56页 |
| 2.3 iTRAQ检测 | 第56-59页 |
| 2.3.1 蛋白提取 | 第56页 |
| 2.3.2 Bradford法测定蛋白质浓度 | 第56页 |
| 2.3.3 蛋白质酶解和除盐 | 第56页 |
| 2.3.4 iTRAQ标记 | 第56页 |
| 2.3.5 强阳离子交换层析分级分离(SCX) | 第56-57页 |
| 2.3.6 LC-ESI-MS/MS质谱鉴定分析 | 第57页 |
| 2.3.7 质谱数据分析 | 第57-58页 |
| 2.3.8 生物信息学分析 | 第58-59页 |
| 2.4 差异蛋白的western-blot验证 | 第59页 |
| 3 结果 | 第59-65页 |
| 3.1 细胞蛋白浓度的检测 | 第59-60页 |
| 3.2 iTRAQ蛋白组学实验结果 | 第60-61页 |
| 3.3 差异蛋白的GO富集功能注释 | 第61-62页 |
| 3.4 KEGG通路中差异蛋白的分析 | 第62-64页 |
| 3.5 差异表达蛋白的Western-blot验证 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 附录1 | 第78-79页 |
| 附录2 | 第79-85页 |
| 附录3 | 第85-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 作者简介 | 第89-90页 |
| 导师简介 | 第90-92页 |
