| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-42页 |
| 1.1 花色素的成分及合成 | 第18-21页 |
| 1.2 矮牵牛的起源及育种概况 | 第21-23页 |
| 1.3 矮牵牛育种目标 | 第23-26页 |
| 1.4 矮牵牛的花色相关基因研究 | 第26-34页 |
| 1.5 矮牵牛的花色基因工程研究 | 第34-37页 |
| 1.6 矮牵牛遗传转化方法发展 | 第37-39页 |
| 1.7 小花矮牵牛与矮牵牛关系 | 第39-41页 |
| 1.8 本研究目的与意义 | 第41-42页 |
| 第二章 矮牵牛 DFR 基因分离及表达特性分析 | 第42-63页 |
| 2.1 材料与方法 | 第42-47页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第42页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第42页 |
| 2.1.3 DFR 基因克隆 | 第42-45页 |
| 2.1.4 DFR 基因表达相对定量测定 | 第45页 |
| 2.1.5 DFR 酶活性测定 | 第45-46页 |
| 2.1.6 不同株系矮牵牛花色素苷含量的测定 | 第46-47页 |
| 2.2 结果与分析 | 第47-61页 |
| 2.2.1 RNA 提取 | 第47-48页 |
| 2.2.2 矮牵牛 DFR 基因分离 | 第48页 |
| 2.2.3 矮牵牛 DFR 特性分析 | 第48-50页 |
| 2.2.4 矮牵牛 DFR 基因表达组织特异性分析 | 第50-53页 |
| 2.2.5 矮牵牛 DFR 酶活性组织特异性分析 | 第53-54页 |
| 2.2.6 DFR 酶活性与 DFR mRNA 相关性 | 第54-55页 |
| 2.2.7 矮牵牛中花青素苷含量 UPLC 检测方法优化 | 第55-61页 |
| 2.2.8 不同矮牵牛株系中花青素苷含量测定 | 第61页 |
| 2.3 讨论 | 第61-62页 |
| 2.4 本章小结 | 第62-63页 |
| 第三章 四种植物 DFR 基因克隆及表达载体构建 | 第63-84页 |
| 3.1 材料与方法 | 第63-69页 |
| 3.1.1 四种植物 DFR 基因克隆 | 第63-65页 |
| 3.1.2 表达载体构建 | 第65-69页 |
| 3.2 结果与分析 | 第69-80页 |
| 3.2.1 四种植物来源 DFR 基因克隆 | 第69-78页 |
| 3.2.2 DFR 表达载体构建 | 第78-80页 |
| 3.3 讨论 | 第80-83页 |
| 3.3.1 DFR 基因 CDS 区的获取 | 第80-81页 |
| 3.3.2 RNA 提取适宜时期及方法探讨 | 第81页 |
| 3.3.3 基于 SMART 试剂盒的 RACE 操作 | 第81-82页 |
| 3.3.4 CaDFR 的特点分析 | 第82页 |
| 3.3.5 外源 DNA 对大肠杆菌转化效率的影响 | 第82页 |
| 3.3.6 质粒的量对大肠杆菌转化效率的影响 | 第82页 |
| 3.3.7 扩增外源基因中酶的选择 | 第82-83页 |
| 3.4 本章小结 | 第83-84页 |
| 第四章 矮牵牛转化及转化子鉴定 | 第84-102页 |
| 4.1 材料与方法 | 第84-90页 |
| 4.1.1 材料 | 第84页 |
| 4.1.2 试剂与引物 | 第84页 |
| 4.1.3 方法 | 第84-90页 |
| 4.2 结果与分析 | 第90-99页 |
| 4.2.1 受体材料生物学特征 | 第90-91页 |
| 4.2.2 矮牵牛种子无菌萌发 | 第91页 |
| 4.2.3 矮牵牛卡那霉素选择压的确定 | 第91-93页 |
| 4.2.4 农杆菌介导的叶盘法转化矮牵牛 | 第93-95页 |
| 4.2.5 炼苗成活率影响因素 | 第95-97页 |
| 4.2.6 转化植株的检测鉴定 | 第97-99页 |
| 4.3 讨论 | 第99-101页 |
| 4.3.1 共培养后 MS 液体培养基振荡抑菌对外植体活力的影响 | 第99-100页 |
| 4.3.2 适宜的抗生素种类筛选 | 第100页 |
| 4.3.3 适宜的头孢霉素浓度 | 第100页 |
| 4.3.4 延迟培养对转化的影响 | 第100页 |
| 4.3.5 生根培养中的筛选剂添加的必要性 | 第100-101页 |
| 4.4 本章小结 | 第101-102页 |
| 第五章 转化子表型观察及表达测定 | 第102-130页 |
| 5.1 材料与方法 | 第102-103页 |
| 5.1.1 DFR 基因表达相对定量测定 | 第102页 |
| 5.1.2 DFR 酶活性测定 | 第102页 |
| 5.1.3 转化子花色素苷含量的测定 | 第102-103页 |
| 5.2 结果与分析 | 第103-122页 |
| 5.2.1 DFR 表达相对定量检测标准曲线绘制 | 第103-105页 |
| 5.2.2 ‘9702’转入不同 DFR 基因表型及表达分析 | 第105-116页 |
| 5.2.3 ‘Lx’转入不同 DFR 基因表型及表达分析 | 第116-119页 |
| 5.2.4 ‘2512’转入不同基因表型及表达分析 | 第119-121页 |
| 5.2.5 ‘W115’转入不同 DFR 基因表型及表达分析 | 第121-122页 |
| 5.3 讨论 | 第122-127页 |
| 5.3.1 不同来源 DFR 对矮牵牛花色的影响 | 第122-123页 |
| 5.3.2 外源基因在矮牵牛的表达不同的可能原因 | 第123-124页 |
| 5.3.3 ‘LH26’表型的可能原因 | 第124页 |
| 5.3.4 飞燕草色素的 UPLC 检测 | 第124-125页 |
| 5.3.5 UPLC 检测单一花青素苷标准品的可能性 | 第125页 |
| 5.3.6 外源基因拷贝数对花色的影响 | 第125页 |
| 5.3.7 DFR mRNA 相对浓度与外源基因拷贝数的关系 | 第125页 |
| 5.3.8 调节基因 AN2 对花色的影响 | 第125-126页 |
| 5.3.9 花药中 DFR 基因的表达 | 第126页 |
| 5.3.10 DFR 酶活性与花青素苷含量相关性分析 | 第126-127页 |
| 5.4 本章小结 | 第127-130页 |
| 第六章 转化子遗传稳定性观测 | 第130-134页 |
| 6.1 材料与方法 | 第130页 |
| 6.2 结果与分析 | 第130-132页 |
| 6.2.1 转基因矮牵牛 T1 代生物学表型 | 第130-132页 |
| 6.2.2 PCR 检测结果 | 第132页 |
| 6.3 讨论 | 第132-133页 |
| 6.3.1 T1 代种子发芽率低的可能原因 | 第132-133页 |
| 6.3.2 T1 代种子性状分离的原因 | 第133页 |
| 6.4 本章小结 | 第133-134页 |
| 第七章 本文总结 | 第134-139页 |
| 7.1 研究的主要结论 | 第134-136页 |
| 7.2 研究的创新点 | 第136页 |
| 7.3 研究中发现的问题 | 第136-137页 |
| 7.4 今后工作展望 | 第137-139页 |
| 附录 | 第139-151页 |
| 附录1：符号说明 | 第139-140页 |
| 附录2：本研究中使用的主要仪器设备 | 第140-142页 |
| 附录3：分离的 DFR 序列 | 第142-151页 |
| 参考文献 | 第151-163页 |
| 致谢 | 第163-165页 |
| 攻读博士学位期间已发表或录用的论文 | 第165页 |
