| 缩略词 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 非洲猪瘟病毒 | 第12-15页 |
| 1.2.1 非洲猪瘟病毒粒子的形态结构 | 第12页 |
| 1.2.2 非洲猪瘟病毒的理化特性 | 第12-13页 |
| 1.2.3 非洲猪瘟病毒基因组结构 | 第13页 |
| 1.2.4 非洲猪瘟病毒的主要蛋白及功能 | 第13-14页 |
| 1.2.5 非洲猪瘟病毒的感染机制及细胞嗜性 | 第14-15页 |
| 1.3 非洲猪瘟的流行病学 | 第15-16页 |
| 1.4 非洲猪瘟的临床症状及病变 | 第16-17页 |
| 1.5 非洲猪瘟的诊断 | 第17-19页 |
| 1.5.1 聚合酶链式反应 | 第17页 |
| 1.5.2 荧光定量PCR | 第17-18页 |
| 1.5.3 环介导等温扩增 | 第18页 |
| 1.5.4 血细胞吸附试验 | 第18页 |
| 1.5.5 酶联免疫吸附试验 | 第18-19页 |
| 1.5.6 胶体金试纸条 | 第19页 |
| 1.6 非洲猪瘟病毒的疫苗研究 | 第19-21页 |
| 1.6.1 灭活和弱毒疫苗 | 第19-20页 |
| 1.6.2 弱毒疫苗 | 第20页 |
| 1.6.3 亚单位疫苗 | 第20-21页 |
| 1.6.4 核酸疫苗 | 第21页 |
| 1.7 本研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二章 非洲猪瘟病毒p72蛋白原核表达 | 第22-35页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 质粒与菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 主要耗材 | 第22-23页 |
| 2.1.3 相关试剂的配制 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-29页 |
| 2.2.1 目的基因与引物的合成 | 第25页 |
| 2.2.2 目的基因的扩增与回收 | 第25-26页 |
| 2.2.3 重组质粒pMD18-T-p72的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.4 重组质粒pET-30a-p72的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.5 p72 蛋白的原核表达和SDS-PAGE验证 | 第28-29页 |
| 2.2.6 p72蛋白的可溶性分析与纯化 | 第29页 |
| 2.3 结果 | 第29-33页 |
| 2.3.1 目的基因的扩增 | 第29-30页 |
| 2.3.2 重组质粒pMD18-T-p72的鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.3 重组质粒pET-30a-p72的鉴定 | 第31页 |
| 2.3.4 确定重组蛋白的最佳表达条件 | 第31-32页 |
| 2.3.5 重组蛋白的可溶性分析与纯化结果 | 第32-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-34页 |
| 2.5 小结 | 第34-35页 |
| 第三章 非洲猪瘟病毒p72蛋白真核表达 | 第35-42页 |
| 3.1 试验材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 质粒、菌株及细胞 | 第35页 |
| 3.1.2 主要试剂及耗材 | 第35页 |
| 3.1.3 相关试剂的配制 | 第35-36页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第36页 |
| 3.2 试验方法 | 第36-38页 |
| 3.2.1 p72基因的扩增 | 第36-37页 |
| 3.2.2 重组质粒pCAGGS-HA-p72 的构建 | 第37页 |
| 3.2.3 重组质粒pCAGGS-HA-p72 的瞬时转染 | 第37-38页 |
| 3.2.4 Western Blot检测pCAGGS-HA-p72 的表达情况 | 第38页 |
| 3.3 试验结果 | 第38-40页 |
| 3.3.1 p72基因的扩增 | 第38-39页 |
| 3.3.2 重组质粒pCAGGS-HA-p72 的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.3.3 Western Blot检测pCAGGS-HA-p72在293T细胞中的表达 | 第40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-41页 |
| 3.5 小结 | 第41-42页 |
| 第四章 非洲猪瘟病毒p72蛋白单克隆抗体的制备 | 第42-56页 |
| 4.1 试验材料 | 第42-43页 |
| 4.1.1 抗原、细胞和试验动物 | 第42页 |
| 4.1.2 试验耗材及试剂 | 第42页 |
| 4.1.3 试验仪器 | 第42-43页 |
| 4.2 试验方法 | 第43-49页 |
| 4.2.1 动物免疫 | 第43-44页 |
| 4.2.2 SP2/0骨髓瘤细胞的制备 | 第44-45页 |
| 4.2.3 饲养细胞的制备 | 第45页 |
| 4.2.4 免疫脾细胞的采集 | 第45页 |
| 4.2.5 细胞融合 | 第45-46页 |
| 4.2.6 阳性杂交瘤筛选 | 第46页 |
| 4.2.7 阳性杂交瘤细胞的亚克隆 | 第46页 |
| 4.2.8 制备腹水 | 第46-47页 |
| 4.2.9 单克隆抗体Western Blot检测 | 第47页 |
| 4.2.10 单克隆抗体IFA检测 | 第47-48页 |
| 4.2.11 单克隆抗体亚型鉴定 | 第48页 |
| 4.2.12 单克隆抗体的特异性检测 | 第48-49页 |
| 4.3 结果 | 第49-54页 |
| 4.3.1 最佳抗原包被稀释度的确定 | 第49页 |
| 4.3.2 免疫小鼠的血清效价测定 | 第49-50页 |
| 4.3.3 细胞融合 | 第50页 |
| 4.3.4 阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第50-51页 |
| 4.3.5 阳性杂交瘤细胞的亚克隆 | 第51-52页 |
| 4.3.6 单克隆抗体的Western Blot验证 | 第52页 |
| 4.3.7 单克隆抗体的IFA验证 | 第52-53页 |
| 4.3.8 单抗的亚型鉴定 | 第53页 |
| 4.3.9 单克隆抗体的特异性检测 | 第53-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-55页 |
| 4.5 小结 | 第55-56页 |
| 第五章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
