| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 前言 | 第11-23页 |
| 1 溶解多糖单加氧酶研究概况 | 第11-17页 |
| 1.1 溶解多糖单加氧酶 | 第11页 |
| 1.2 溶解多糖单加氧酶的分类 | 第11-12页 |
| 1.3 溶解多糖单加氧酶的来源 | 第12页 |
| 1.4 溶解多糖单加氧酶的结构与催化机制 | 第12-15页 |
| 1.5 溶解多糖单加氧酶的作用底物 | 第15页 |
| 1.6 溶解多糖单加氧酶活性检测 | 第15-16页 |
| 1.7 溶解多糖单加氧酶的应用 | 第16-17页 |
| 2 异源表达系统选择 | 第17-21页 |
| 2.1 原核表达系统 | 第18-19页 |
| 2.2 真核表达系统 | 第19-21页 |
| 3 研究目的和意义 | 第21页 |
| 4 研究内容和实验方案 | 第21-23页 |
| 4.1 研究内容 | 第21-22页 |
| 4.2 实验方案 | 第22-23页 |
| 第一章 Aspergillus oryzae LPMO基因克隆 | 第23-33页 |
| 1 材料与方法 | 第23-29页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第23页 |
| 1.2 试剂 | 第23-24页 |
| 1.3 实验仪器 | 第24页 |
| 1.4 培养基 | 第24-25页 |
| 1.5 基因组提取 | 第25页 |
| 1.6 引物设计与PCR扩增 | 第25-26页 |
| 1.7 基因片段纯化 | 第26-27页 |
| 1.8 基因克隆与分析 | 第27-29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-32页 |
| 2.1 基因组DNA提取 | 第29页 |
| 2.2 目的基因扩增 | 第29-30页 |
| 2.3 PCR产物纯化 | 第30-31页 |
| 2.4 目的基因TA克隆及PCR验证 | 第31页 |
| 2.5 单菌落质粒抽提 | 第31-32页 |
| 3 小结 | 第32-33页 |
| 第二章 Aspergillus oryzae LPMOs基因在大肠杆菌中的表达 | 第33-48页 |
| 1 材料与方法 | 第33-41页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第33-34页 |
| 1.2 试剂 | 第34页 |
| 1.3 仪器设备 | 第34页 |
| 1.4 培养基和缓冲液 | 第34页 |
| 1.5 引物设计及表达载体的构建 | 第34-37页 |
| 1.6 重组质粒转化E.coli BL21 | 第37页 |
| 1.7 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第37-38页 |
| 1.8 重组大肠杆菌诱导表达 | 第38页 |
| 1.9 SDS-PAGE分析 | 第38-39页 |
| 1.10 蛋白浓度测定 | 第39-40页 |
| 1.11 重组LPMOs诱导条件优化 | 第40页 |
| 1.12 重组LPMOs纯化 | 第40-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-46页 |
| 2.1 pET32a表达载体构建 | 第41-42页 |
| 2.2 重组菌筛选 | 第42-43页 |
| 2.3 重组LPMOs诱导表达 | 第43页 |
| 2.4 重组LPMOs诱导条件优化 | 第43-46页 |
| 2.5 重组LPMOs纯化 | 第46页 |
| 3 小结 | 第46-48页 |
| 第三章 重组溶解多糖单加氧酶的酶学性质分析 | 第48-54页 |
| 1 材料与方法 | 第48-50页 |
| 1.1 试剂 | 第48页 |
| 1.2 缓冲液配置 | 第48页 |
| 1.3 pH对重组LPMOs的影响 | 第48-49页 |
| 1.4 温度对重组LPMOs的影响 | 第49页 |
| 1.5 无机盐对重组LPMOs的影响 | 第49-50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-53页 |
| 2.1 pH对重组LPMOs的影响 | 第50-51页 |
| 2.2 温度对重组LPMOs的影响 | 第51-52页 |
| 2.3 无机盐对重组LPMOs的影响 | 第52-53页 |
| 3 小结 | 第53-54页 |
| 第四章 Aspergillus oryzae溶解多糖单加氧酶基因在毕赤酵母中的异源表达 | 第54-65页 |
| 1 材料与方法表达 | 第54-61页 |
| 1.1 菌株 | 第54页 |
| 1.2 质粒 | 第54页 |
| 1.3 试验仪器设备 | 第54-55页 |
| 1.4 培养基 | 第55页 |
| 1.5 引物设计及PCR扩增 | 第55-57页 |
| 1.6 表达载体构建 | 第57-58页 |
| 1.7 重组质粒转化E.coli DH5α | 第58页 |
| 1.8 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第58页 |
| 1.9 毕赤酵母GS115电击转化 | 第58-60页 |
| 1.10 重组酵母转化子筛选 | 第60-61页 |
| 1.11 重组酵母摇瓶发酵 | 第61页 |
| 2 结果与分析 | 第61-64页 |
| 2.1 LPMOs基因毕赤酵母表达载体和表达菌株构建 | 第61-62页 |
| 2.2 LPMOs基因的PCR扩增 | 第62-63页 |
| 2.3 重组LPMOs酶活检测 | 第63-64页 |
| 3 小结 | 第64-65页 |
| 本文总结与创新点 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 附录 | 第73-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
