| 中文摘要 | 第12-14页 |
| ABSTRACT | 第14-15页 |
| 第一章 前言 | 第16-22页 |
| 1.1 脂肪酶的简介 | 第16-20页 |
| 1.1.1 脂肪酶的来源 | 第16-17页 |
| 1.1.2 脂肪酶的结构和催化机理 | 第17-18页 |
| 1.1.3 脂肪酶的研究现状 | 第18-19页 |
| 1.1.4 脂肪酶的应用 | 第19-20页 |
| 1.2 耐高温脂肪酶 | 第20-22页 |
| 1.2.1 本论文耐高温脂肪酶的来源 | 第20-21页 |
| 1.2.2 耐高温脂肪酶的研究现状 | 第21-22页 |
| 1.3 本课题的研究目的和意义 | 第22页 |
| 第二章 产耐高温脂肪酶菌株的筛选和鉴定 | 第22-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 材料和试剂 | 第23页 |
| 2.1.2 培养基 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-25页 |
| 2.2.1 初筛 | 第24页 |
| 2.2.2 复筛 | 第24页 |
| 2.2.3 脂肪酶酶活的测定 | 第24-25页 |
| 2.2.4 基因组DNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.5 16S rRNA基因的PCR扩增 | 第25页 |
| 2.2.6 系统发育树的构建 | 第25页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第25-28页 |
| 2.3.1 初筛与复筛 | 第25-26页 |
| 2.3.2 菌株BI-19号菌的种属鉴定 | 第26-28页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第28页 |
| 第三章 Bacillus sp.BI-19菌株的发酵条件优化 | 第28-41页 |
| 3.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 3.1.1 菌株 | 第29页 |
| 3.1.2 试剂 | 第29页 |
| 3.2 试验方法 | 第29-36页 |
| 3.2.1 制备种子液 | 第29页 |
| 3.2.2 标准曲线的制备 | 第29-30页 |
| 3.2.3 菌株的生物量和酶活曲线 | 第30页 |
| 3.2.4 单因素实验 | 第30-32页 |
| 3.2.5 设计Plackett-Burman实验 | 第32-33页 |
| 3.2.6 最陡爬坡实验 | 第33-34页 |
| 3.2.7 Box-Behnken设计及结果 | 第34-36页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第36-40页 |
| 3.3.1 BI-19号菌株的生长曲线和产酶曲线 | 第36-37页 |
| 3.3.2 单因素实验结果 | 第37-39页 |
| 3.3.3 响应面分析结果 | 第39-40页 |
| 3.4 实验小结与讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 Bacillus sp.B1-19菌株基因组DNA质粒文库的构建与耐高温脂肪酶基因的克隆 | 第41-47页 |
| 4.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 4.1.1 菌株与常用软件 | 第41页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第41-42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-43页 |
| 4.2.1 基因组DNA提取 | 第42页 |
| 4.2.2 基因组DNA质粒文库的构建 | 第42页 |
| 4.2.3 产高温脂肪酶基因克隆的筛选 | 第42页 |
| 4.2.4 高温脂肪酶的基因序列分析 | 第42-43页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第43-47页 |
| 4.3.1 基因组DNA的提取 | 第43页 |
| 4.3.2 菌落PCR检测和测序验证 | 第43-44页 |
| 4.3.3 阳性克隆的筛选 | 第44页 |
| 4.3.4 脂肪酶基因的序列分析 | 第44-47页 |
| 4.4 实验小结与讨论 | 第47页 |
| 第五章 脂肪酶基因lip-1954和lip-0256的异源表达 | 第47-55页 |
| 5.1 实验材料与方法 | 第48-49页 |
| 5.1.1 实验菌株 | 第48页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第48页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第48-49页 |
| 5.2 试验方法 | 第49-51页 |
| 5.2.1 基因组DNA的提取 | 第49页 |
| 5.2.2 设计引物并引物PCR | 第49页 |
| 5.2.3 琼脂糖凝胶回收 | 第49页 |
| 5.2.4 连接pMD18-T simple载体 | 第49-50页 |
| 5.2.5 质粒提取和PCR检测 | 第50页 |
| 5.2.6 双酶切和琼脂糖凝胶回收 | 第50页 |
| 5.2.7 连接到表达载体pET-30(a+)并PCR检测 | 第50页 |
| 5.2.8 转化入T0P10并测序 | 第50-51页 |
| 5.2.9 提取TOP10的质粒并转化入BL21中 | 第51页 |
| 5.2.10 耐高温脂肪酶的诱导表达 | 第51页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第51-54页 |
| 5.3.1 基因组DNA提取和引物PCR | 第51-52页 |
| 5.3.2 重组酶的诱导表达结果 | 第52-54页 |
| 5.4 实验小结和讨论 | 第54-55页 |
| 第六章 重组酶Lip-1954的酶学性质研究 | 第55-61页 |
| 6.1 实验材料 | 第55页 |
| 6.1.1 菌株与仪器 | 第55页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第55页 |
| 6.2 实验方法 | 第55-57页 |
| 6.2.1 目的蛋白的分离纯化 | 第56页 |
| 6.2.2 重组酶的酶学性质研究 | 第56-57页 |
| 6.3 实验结果与分析 | 第57-60页 |
| 6.3.1 蛋白纯化 | 第57-58页 |
| 6.3.2 酶学性质研究 | 第58-60页 |
| 6.4 实验小结与讨论 | 第60-61页 |
| 第七章 总结和展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 硕士期间发表文章 | 第74-75页 |
| 附件 | 第75页 |
