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PR8流感突变株的制备及其生长特性的研究

摘要第1-4页
Abstract第4-9页
引言第9-33页
 1 禽流感病毒研究进展第9-19页
   ·流感病毒的形态和结构第9页
   ·禽流感病毒基因组编码的蛋白质第9-16页
     ·血凝素(HEMAGGLUTININ,HA)第10-12页
     ·神经氨酸酶(NEURAMINIDASE,NA)第12页
     ·核蛋白(NUCLEOPROTEIN,NP)第12-13页
     ·基质蛋白(MATRIX PROTEIN,M)第13-14页
     ·非结构蛋白(NONSTRUCTURAL PROTEIN,NS)第14-15页
     ·聚合酶蛋白(POLYMERASE)第15-16页
   ·流感病毒的复制第16-19页
     ·吸附、穿膜和脱壳第16-17页
     ·基因组的转录与复制第17页
     ·病毒蛋白的合成第17页
     ·病毒粒子的装配第17-18页
     ·病毒的出芽和释放第18-19页
 2 禽流感疫苗的研究进展第19-25页
   ·全病毒灭活疫苗第19-20页
   ·亚单位疫苗第20页
   ·核酸疫苗第20-21页
   ·重组活载体疫苗第21-22页
   ·反基因操作疫苗第22页
   ·复制缺陷型流感病毒疫苗第22页
   ·RNA 复制子疫苗第22页
   ·抗独特型抗体疫苗第22-23页
   ·减毒活疫苗第23页
   ·抗原表位疫苗第23-24页
   ·以哺乳动物细胞为基质制备的流感疫苗第24-25页
 3 反向遗传操作系统第25-32页
   ·流感病毒反向遗传操作技术体系的建立第25-31页
     ·流感病毒功能性RNPS 的建立第26页
     ·以辅助流感病毒为基础的反向遗传操作系统第26-27页
     ·完全以克隆的CDNA 为基础的反向遗传操作系统第27-31页
   ·流感病毒反向遗传操作技术的应用第31-32页
 4 研究目的和意义第32-33页
实验部分第33-51页
 1 材料第33-34页
   ·细胞、菌种和质粒第33页
   ·SPF 鸡胚第33页
   ·主要试剂和主要仪器第33-34页
   ·引物第34页
 2 方法第34-42页
   ·两步PCR 定点突变第34-35页
   ·PCR 产物的回收和纯化第35-36页
   ·回收目的DNA 片段和载体PBD 的酶切处理第36页
   ·目的基因与PBD 载体的连接、转化第36-37页
     ·PBD 载体的提取第36页
     ·目的基因DNA 与PBD 质粒载体的连接第36-37页
     ·JM109 感受态细胞的制备第37页
     ·质粒DNA 的转化第37页
   ·阳性克隆质粒的纯化与鉴定第37-38页
     ·阳性克隆质粒的筛选第37页
     ·酚氯仿高真空绝缘硅脂粗提质粒第37-38页
     ·质粒DNA PCR 鉴定第38页
   ·突变病毒的拯救第38-40页
     ·转染前质粒的准备第38-39页
     ·转染用质粒的定量与活性测定第39页
     ·转染前细胞的准备第39页
     ·质粒的组合第39页
     ·转染第39-40页
   ·救获病毒的血凝试验第40页
   ·救获突变病毒的鉴定第40-41页
     ·RNA 的提取第40-41页
     ·RT-PCR 反应第41页
   ·救获的PR8 株和突变株TCID50 的测定第41-42页
   ·救获的PR8 株和突变株EID50 的测定第42页
   ·救获的PR8 株和突变株在鸡胚上生长特性的比较第42页
 3 结果第42-48页
   ·NS,NP 基因的 PCR 扩增,克隆与鉴定第42页
   ·救获病毒的鉴定结果第42-44页
   ·救获病毒 TCID50 的测定结果第44-45页
   ·救获病毒 EID50 的测定结果第45-46页
   ·救获野生病毒与突变病毒的生长特性比较第46-48页
 4 小结与讨论第48-50页
 5 结论第50-51页
致谢第51-52页
参考文献第52-61页
作者简介第61页

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