| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第15-33页 |
| 1.1 引言 | 第15-16页 |
| 1.2 拟除虫菊酯类农药概述 | 第16-20页 |
| 1.2.1 拟除虫菊酯的发展概况 | 第16-17页 |
| 1.2.2 常用拟除虫菊酯 | 第17-19页 |
| 1.2.3 拟除虫菊酯的残留及危害 | 第19-20页 |
| 1.3 拟除虫菊酯的微生物降解研究 | 第20-25页 |
| 1.3.1 拟除虫菊酯降解微生物的分离和降解特性 | 第20-21页 |
| 1.3.2 拟除虫菊酯的降解机理和代谢途径 | 第21-25页 |
| 1.4 拟除虫菊酯降解酶的研究 | 第25-32页 |
| 1.4.1 拟除虫菊酯降解酶的概述 | 第25-26页 |
| 1.4.2 拟除虫菊酯降解酶的分离纯化 | 第26-27页 |
| 1.4.3 拟除虫菊酯降解酶的降解特性 | 第27-29页 |
| 1.4.4 拟除虫菊酯降解酶的组成及结构 | 第29-30页 |
| 1.4.5 拟除虫菊酯降解酶的基因克隆 | 第30-32页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第32-33页 |
| 第二章 拟除虫菊酯降解菌的鉴定和产酶培养基的筛选 | 第33-48页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第33-34页 |
| 2.1.1 菌种和培养基 | 第33页 |
| 2.1.2 试剂 | 第33-34页 |
| 2.1.3 设备与型号 | 第34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-38页 |
| 2.2.1 拟除虫菊酯乳液的配置 | 第34页 |
| 2.2.2 菌种的培养 | 第34-35页 |
| 2.2.3 菊酯降解酶活力的测定 | 第35页 |
| 2.2.4 拟除虫菊酯含量的测定 | 第35-36页 |
| 2.2.5 菌株GF31对拟除虫菊酯的降解 | 第36页 |
| 2.2.6 菌株16SrDNA分子发育鉴定 | 第36-37页 |
| 2.2.7 菌株GF31的降解酶定域 | 第37页 |
| 2.2.8 产酶培养基的优化 | 第37-38页 |
| 2.2.9 菌株GF31的生长和产酶曲线 | 第38页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第38-47页 |
| 2.3.1 菌株GF31对拟除虫菊酯的降解 | 第38-39页 |
| 2.3.2 菌株16S rDNA分子发育鉴定 | 第39-41页 |
| 2.3.3 菌株GF31的降解酶定域 | 第41页 |
| 2.3.4 产酶培养基的筛选 | 第41-46页 |
| 2.3.5 菌株GF31的生长和产酶曲线 | 第46-47页 |
| 2.4 本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章 拟除虫菊酯降解酶的分离纯化 | 第48-62页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第48-49页 |
| 3.1.1 层析材料 | 第48-49页 |
| 3.1.2 试剂 | 第49页 |
| 3.1.3 设备与型号 | 第49页 |
| 3.2 实验方法 | 第49-53页 |
| 3.2.1 分析方法 | 第49-50页 |
| 3.2.2 菊酯降解酶粗酶液的制备 | 第50-51页 |
| 3.2.3 超滤浓缩粗酶液 | 第51页 |
| 3.2.4 硫酸铵分级盐析 | 第51页 |
| 3.2.5 DEAE FF离子交换层析 | 第51-52页 |
| 3.2.6 Sephadex G75凝胶层析 | 第52-53页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第53-61页 |
| 3.3.1 菊酯降解酶粗酶液的制备 | 第53-54页 |
| 3.3.2 超滤浓缩粗酶液 | 第54-55页 |
| 3.3.3 硫酸铵分级沉淀 | 第55-56页 |
| 3.3.4 DEAE FF离子交换层析 | 第56-57页 |
| 3.3.5 Sephadex G75凝胶层析 | 第57-59页 |
| 3.3.6 蛋白纯度及分子量测定 | 第59页 |
| 3.3.7 纯化酶对氯氰菊酯的降解 | 第59-61页 |
| 3.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 第四章 拟除虫菊酯降解酶的鉴定及表征 | 第62-75页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第62-63页 |
| 4.1.1 菊酯降解酶 | 第62页 |
| 4.1.2 试剂 | 第62页 |
| 4.1.3 设备与型号 | 第62-63页 |
| 4.2 实验方法 | 第63-65页 |
| 4.2.1 质谱分子量测定 | 第63页 |
| 4.2.2 氨基酸组成分析 | 第63页 |
| 4.2.3 N-端氨基酸序列测定 | 第63页 |
| 4.2.4 菊酯降解酶的等电点测定 | 第63页 |
| 4.2.5 二硫键的鉴定 | 第63页 |
| 4.2.6 糖基化的鉴定 | 第63-64页 |
| 4.2.7 紫外光谱分析 | 第64页 |
| 4.2.8 圆二色谱分析 | 第64页 |
| 4.2.9 MALDI-TOF/TOF测定酶蛋白的肽指纹图谱 | 第64页 |
| 4.2.10 蛋白质序列数据库检索 | 第64-65页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第65-73页 |
| 4.3.1 质谱分子量测定 | 第65页 |
| 4.3.2 氨基酸组成分析 | 第65-67页 |
| 4.3.3 N-端氨基酸序列测定 | 第67页 |
| 4.3.4 菊酯降解酶的等电点测定 | 第67-68页 |
| 4.3.5 二硫键的鉴定 | 第68页 |
| 4.3.6 糖基化的鉴定 | 第68-69页 |
| 4.3.7 紫外光谱分析 | 第69页 |
| 4.3.8 圆二色谱分析 | 第69-71页 |
| 4.3.9 MALDI-TOF/TOF测定酶蛋白的肽指纹图谱 | 第71-72页 |
| 4.3.10 蛋白质序列数据库检索 | 第72-73页 |
| 4.4 本章小结 | 第73-75页 |
| 第五章 拟除虫菊酯降解酶的基因克隆及表达 | 第75-94页 |
| 5.1 材料和仪器 | 第75-76页 |
| 5.1.1 菌株与质粒 | 第75页 |
| 5.1.2 培养基 | 第75页 |
| 5.1.3 试剂盒、克隆用酶及其他试剂 | 第75-76页 |
| 5.1.4 实验设备与型号 | 第76页 |
| 5.2 实验方法 | 第76-79页 |
| 5.2.1 菌株GF31基因组的提取和回收 | 第76页 |
| 5.2.2 PCR扩增菊酯降解酶基因 | 第76-77页 |
| 5.2.3 构建重组质粒pET43.1a-APs | 第77-78页 |
| 5.2.4 工程菌BL21(DE3)-pET43.1a-APs的构建 | 第78页 |
| 5.2.5 APs基因在大肠杆菌E-coli BL21中的表达 | 第78页 |
| 5.2.6 APs基因的生物信息学分析 | 第78-79页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第79-93页 |
| 5.3.1 PCR扩增菊酯降解酶基因 | 第79-80页 |
| 5.3.2 重组质粒pET43.1a-APs的构建 | 第80-81页 |
| 5.3.3 重组质粒pET43.1a-APs的测序分析 | 第81-82页 |
| 5.3.4 APs基因在大肠杆菌E-coli BL21中的表达 | 第82-84页 |
| 5.3.5 APs基因的生物信息学分析 | 第84-93页 |
| 5.4 本章小结 | 第93-94页 |
| 第六章 拟除虫菊酯降解酶的降解特性 | 第94-107页 |
| 6.1 材料与仪器 | 第94-95页 |
| 6.1.1 菊酯降解酶 | 第94页 |
| 6.1.2 试剂 | 第94页 |
| 6.1.3 设备与型号 | 第94-95页 |
| 6.2 实验方法 | 第95-98页 |
| 6.2.1 分析方法 | 第95页 |
| 6.2.2 pH值对菊酯降解酶活力的影响 | 第95页 |
| 6.2.3 菊酯降解酶的pH稳定性 | 第95页 |
| 6.2.4 温度对菊酯降解酶活力的影响 | 第95-96页 |
| 6.2.5 菊酯降解酶的热稳定性 | 第96页 |
| 6.2.6 拟除虫菊酯的降解进程曲线 | 第96页 |
| 6.2.7 降解酶对多种菊酯的降解活力及反应动力学参数 | 第96页 |
| 6.2.8 菊酯降解酶的氨肽酶活力及反应动力学参数 | 第96-97页 |
| 6.2.9 部分金属离子对菊酯降解酶活力的影响 | 第97页 |
| 6.2.10 抑制剂剂对菊酯降解酶活力的影响 | 第97-98页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第98-106页 |
| 6.3.1 pH值对菊酯降解酶活力的影响 | 第98页 |
| 6.3.2 菊酯降解酶的pH稳定性 | 第98-99页 |
| 6.3.3 温度对菊酯降解酶活力的影响 | 第99-100页 |
| 6.3.4 菊酯降解酶的热稳定性 | 第100-101页 |
| 6.3.5 拟除虫菊酯的降解进程曲线 | 第101-102页 |
| 6.3.6 降解酶对多种菊酯的降解活力及反应动力学参数 | 第102-103页 |
| 6.3.7 菊酯降解酶的氨肽酶活力及反应动力学参数 | 第103-104页 |
| 6.3.8 部分金属离子对菊酯降解酶活力的影响 | 第104-105页 |
| 6.3.9 抑制剂对菊酯降解酶活力的影响 | 第105-106页 |
| 6.4 本章小结 | 第106-107页 |
| 第七章 结论与展望 | 第107-110页 |
| 7.1 主要结论 | 第107-108页 |
| 7.2 主要创新点 | 第108页 |
| 7.3 展望 | 第108-110页 |
| 参考文献 | 第110-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第120-121页 |
| 附录 | 第121-124页 |
