| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 主要符号表 | 第10-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-31页 |
| 1.1 n-3 多不饱和脂肪酸(PUFA)的种类及来源 | 第17页 |
| 1.2 n-3 多不饱和脂肪酸的生理功能 | 第17-19页 |
| 1.2.1 防治心血管疾病 | 第17-18页 |
| 1.2.2 抗癌作用 | 第18页 |
| 1.2.3 抗炎作用 | 第18页 |
| 1.2.4 促进视觉系统和神经系统的发育 | 第18-19页 |
| 1.3 n-3 PUFA的存在形式及其生物利用度 | 第19-20页 |
| 1.4 酶法催化合成甘油三酯型n-3 PUFA的研究现状 | 第20-22页 |
| 1.4.1 酶法催化酯化反应合成TAG型n-3 PUFA | 第20-21页 |
| 1.4.2 酶法催化甘油解反应合成TAG型n-3 PUFA | 第21-22页 |
| 1.5 酶法催化合成富含n-3 PUFA的磷脂的研究进展 | 第22-27页 |
| 1.5.1 磷脂的概述 | 第22-23页 |
| 1.5.2 磷脂的生理功能与应用 | 第23页 |
| 1.5.3 磷脂的改性 | 第23-25页 |
| 1.5.4 酶法催化合成磷脂型n-3 PUFA的研究现状 | 第25-27页 |
| 1.5.4.1 酶法催化酸解法 | 第25页 |
| 1.5.4.2 酶法催化酯交换法 | 第25-26页 |
| 1.5.4.3 酶法催化酯化法 | 第26-27页 |
| 1.6 脂肪酶MAS1的概述 | 第27页 |
| 1.7 固定化酶的概述 | 第27-29页 |
| 1.7.1 固定化载体 | 第27-28页 |
| 1.7.2 酶的固定化方法 | 第28-29页 |
| 1.8 本课题研究的主要意义和主要内容 | 第29-31页 |
| 1.8.1 本课题研究的主要意义 | 第29页 |
| 1.8.2 本课题研究的主要内容 | 第29-31页 |
| 第二章 脂肪酶MAS1的固定化、表征及其酶学性质研究 | 第31-53页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第31-33页 |
| 2.1.1 主要材料与试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.2 培养基的配制 | 第32-33页 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 | 第33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-41页 |
| 2.2.1 脂肪酶MAS1的制备 | 第33-34页 |
| 2.2.2 脂肪酶MAS1水解酶活的测定 | 第34-35页 |
| 2.2.3 树脂的预处理 | 第35页 |
| 2.2.4 固定化脂肪酶MAS1的制备 | 第35-36页 |
| 2.2.5 蛋白吸附量的测定 | 第36页 |
| 2.2.6 固定化脂肪酶MAS1酯化活性的测定 | 第36-37页 |
| 2.2.7 傅里叶红外光谱(FT-IR)表征 | 第37页 |
| 2.2.8 固定化脂肪酶MAS1的酶学性质分析 | 第37-39页 |
| 2.2.8.1 最适温度 | 第37页 |
| 2.2.8.2 最适pH值 | 第37-38页 |
| 2.2.8.3 温度耐受性 | 第38页 |
| 2.2.8.4 位置选择性 | 第38页 |
| 2.2.8.5 脂肪酸选择性 | 第38-39页 |
| 2.2.9 脂肪酸组成的分析 | 第39-40页 |
| 2.2.9.1 甲酯化 | 第40页 |
| 2.2.9.2 脂肪酸组成的测定 | 第40页 |
| 2.2.10 液相色谱(HPLC)测定甘油酯和脂肪酸的含量 | 第40-41页 |
| 2.2.11 数据分析 | 第41页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第41-51页 |
| 2.3.1 脂肪酶MAS1的制备 | 第41页 |
| 2.3.2 固定化载体的筛选 | 第41-43页 |
| 2.3.3 固定化条件的优化 | 第43-45页 |
| 2.3.3.1 最适初始缓冲液pH值的确定 | 第43-44页 |
| 2.3.3.2 最佳酶/载体比的确定 | 第44-45页 |
| 2.3.4 固定化脂肪酶MAS1的FT-IR表征 | 第45-46页 |
| 2.3.5 固定化脂肪酶MAS1的酶学性质 | 第46-51页 |
| 2.3.5.1 最适温度 | 第46-47页 |
| 2.3.5.2 最适pH值 | 第47-48页 |
| 2.3.5.3 温度耐受性 | 第48页 |
| 2.3.5.4 位置选择性 | 第48-50页 |
| 2.3.5.5 脂肪酸选择性 | 第50-51页 |
| 2.4 本章小结 | 第51-53页 |
| 第三章 固定化酶MAS1催化酯化反应合成甘油三酯型n-3 PUFA的研究 | 第53-68页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第53-54页 |
| 3.1.1 主要材料与试剂 | 第53-54页 |
| 3.1.2 主要仪器和设备 | 第54页 |
| 3.2 实验方法 | 第54-58页 |
| 3.2.1 鱼油游离n-3 PUFA的制备 | 第54-55页 |
| 3.2.2 固定化酶MAS1催化酯化反应合成TAG型n-3 PUFA | 第55-56页 |
| 3.2.3 固定化酶MAS1的重复利用性 | 第56页 |
| 3.2.4 甘油三酯中的脂肪酸组成测定和分析 | 第56-58页 |
| 3.2.4.1 甘油酯和游离脂肪酸的分离 | 第56-57页 |
| 3.2.4.2 甲酯化 | 第57页 |
| 3.2.4.3 脂肪酸组成的测定 | 第57-58页 |
| 3.2.5 甘油酯和脂肪酸含量的测定 | 第58页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第58-67页 |
| 3.3.1 固定化酶MAS1催化酯化反应合成TAG型n-3 PUFA的条件优化 | 第58-61页 |
| 3.3.1.1 温度对酯化反应的影响 | 第58-59页 |
| 3.3.1.2 加酶量对酯化反应的影响 | 第59-60页 |
| 3.3.1.3 n-3 PUFA与甘油的摩尔比对酯化反应的影响 | 第60-61页 |
| 3.3.2 比较游离酶MAS1与固定化脂肪酶MAS1催化酯化反应的效果 | 第61-62页 |
| 3.3.3 固定化脂肪酶MAS1的重复利用性 | 第62-63页 |
| 3.3.4 比较Novozym 435 和固定化脂肪酶MAS1催化酯化反应的效果 | 第63-67页 |
| 3.4 本章小结 | 第67-68页 |
| 第四章 固定化酶MAS1催化甘油解反应合成甘油三酯型n-3 PUFA的研究 | 第68-84页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第69-70页 |
| 4.1.1 主要材料与试剂 | 第69页 |
| 4.1.2 主要仪器与设备 | 第69-70页 |
| 4.2 实验方法 | 第70-72页 |
| 4.2.1 固定化酶MAS1催化甘油解反应合成TAG型n-3 PUFA | 第70页 |
| 4.2.2 响应面实验设计 | 第70-71页 |
| 4.2.3 甘油解反应产物的纯化 | 第71页 |
| 4.2.4 酸价和过氧化值的测定 | 第71页 |
| 4.2.5 最终产物中TAG的脂肪酸组成测定 | 第71-72页 |
| 4.2.6 甘油酯和乙酯含量的测定 | 第72页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第72-83页 |
| 4.3.1 固定化脂肪酶的筛选 | 第72-74页 |
| 4.3.2 单因素实验优化结果 | 第74-76页 |
| 4.3.2.1 反应温度对TAG含量的影响 | 第74-75页 |
| 4.3.2.2 加酶量对TAG含量的影响 | 第75-76页 |
| 4.3.2.3 乙酯型n-3 PUFA/甘油摩尔比对TAG含量的影响 | 第76页 |
| 4.3.3 响应面实验优化结果 | 第76-82页 |
| 4.3.3.1 响应面实验设计及结果 | 第76-77页 |
| 4.3.3.2 模型建立及拟合分析 | 第77-79页 |
| 4.3.3.3 响应面分析 | 第79-80页 |
| 4.3.3.4 最优条件的确定 | 第80-82页 |
| 4.3.4 甘油解反应产物的纯化 | 第82-83页 |
| 4.4 本章小结 | 第83-84页 |
| 第五章 固定化酶MAS1催化酯交换反应合成磷脂型n-3 PUFA的研究 | 第84-93页 |
| 5.1 材料与仪器 | 第85-86页 |
| 5.1.1 主要材料与试剂 | 第85页 |
| 5.1.2 主要仪器与设备 | 第85-86页 |
| 5.2 实验方法 | 第86-87页 |
| 5.2.1 固定化酶MAS1催化PC与乙酯型n-3 PUFA反应合成磷脂型n-3 PUFA | 第86页 |
| 5.2.2 磷脂含量的测定 | 第86页 |
| 5.2.2.1 反应产物的分离 | 第86页 |
| 5.2.2.2 ~(31)PNMR测定磷脂的含量 | 第86页 |
| 5.2.3 磷脂中脂肪酸组成的测定 | 第86-87页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第87-92页 |
| 5.3.1 乙酯/PC质量比对PC中n-3 PUFA结合率的影响 | 第87页 |
| 5.3.2 加酶量对PC中n-3 PUFA结合率的影响 | 第87-88页 |
| 5.3.3 反应温度对PC中n-3 PUFA结合率的影响 | 第88-89页 |
| 5.3.4 加水量对PC中n-3 PUFA结合率的影响 | 第89-90页 |
| 5.3.5 反应时间对PC中n-3 PUFA结合率的影响 | 第90-91页 |
| 5.3.6 最终产物组成分析 | 第91-92页 |
| 5.4 本章小结 | 第92-93页 |
| 第六章 固定化酶MAS1催化酯化反应合成溶血卵磷脂型n-3 PUFA的研究 | 第93-103页 |
| 6.1 材料与仪器 | 第93-94页 |
| 6.1.1 主要材料与仪器 | 第93-94页 |
| 6.1.2 主要仪器与设备 | 第94页 |
| 6.2 实验方法 | 第94-96页 |
| 6.2.1 鱼油游离n-3 PUFA的制备 | 第94页 |
| 6.2.2 固定化酶 MAS1催化GPC和n-3 PUFA反应合成溶血卵磷脂型n-3PUFA | 第94-95页 |
| 6.2.3 分子对接 | 第95页 |
| 6.2.4 磷脂含量的测定 | 第95页 |
| 6.2.4.1 反应产物的分离 | 第95页 |
| 6.2.4.2 磷脂组成的测定 | 第95页 |
| 6.2.5 反应产物PC和LPC中的脂肪酸组成分析 | 第95-96页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第96-102页 |
| 6.3.1 固定化酶的筛选 | 第96-97页 |
| 6.3.2 底物摩尔比对催化效果的影响 | 第97页 |
| 6.3.3 反应温度对催化效果的影响 | 第97-98页 |
| 6.3.4 加酶量对催化效果的影响 | 第98-99页 |
| 6.3.5 反应时间对催化效果的影响 | 第99-100页 |
| 6.3.6 最终产物LPC和PC中n-3 PUFA结合率的测定 | 第100-101页 |
| 6.3.7 脂肪酶MAS1-GPC复合物的对接模型 | 第101-102页 |
| 6.4 本章小结 | 第102-103页 |
| 结论与展望 | 第103-107页 |
| 结论 | 第103-105页 |
| 本研究的创新点 | 第105页 |
| 未来工作展望 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-121页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第121-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 附表 | 第124页 |
