| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 英文缩略词中英文注释表 | 第18-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-29页 |
| 1.1 概述 | 第19页 |
| 1.2 间质干细胞 | 第19-21页 |
| 1.2.1 间质干细胞的特性 | 第19页 |
| 1.2.2MSC与肿瘤微环境 | 第19-20页 |
| 1.2.3 MSC与p53 | 第20-21页 |
| 1.3 Exosome | 第21-23页 |
| 1.3.1 Exosome的生物学特性、生成与释放 | 第21页 |
| 1.3.2 Exosome的结构和来源 | 第21-22页 |
| 1.3.3 Exosome与肿瘤 | 第22-23页 |
| 1.4 UBR2蛋白及功能 | 第23-24页 |
| 1.5 研究目的、方法、技术路线和意义 | 第24-29页 |
| 1.5.1 研究目的 | 第24页 |
| 1.5.2 研究方法 | 第24页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第24-27页 |
| 1.5.4 研究意义 | 第27-29页 |
| 第二章 mBMMSC分泌Exosome的鉴定与比较 | 第29-35页 |
| 2.1 材料 | 第29-30页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第29页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 2.1.3 主要的仪器及相关耗材 | 第29-30页 |
| 2.2 方法 | 第30-32页 |
| 2.2.1 mBMMSC的分离与培养 | 第30页 |
| 2.2.2 细胞冻存 | 第30-31页 |
| 2.2.3 细胞复苏 | 第31页 |
| 2.2.4 去除exosome胎牛血清制备 | 第31页 |
| 2.2.5 细胞上清制备 | 第31页 |
| 2.2.6 细胞上清exosome提取 | 第31页 |
| 2.2.7 透射电镜观察exosome的形态 | 第31页 |
| 2.2.8 Nanosight分析exosome的数量及大小 | 第31-32页 |
| 2.2.9 Western blot检测exosome标志物 | 第32页 |
| 2.2.10 统计分析 | 第32页 |
| 2.3 结果 | 第32-34页 |
| 2.3.1 透射电镜鉴定p53~(+/+)mBMMSC和p53~(-/-)mBMMSC来源的exosome | 第32-33页 |
| 2.3.2 Nanosight纳米颗粒跟踪分析仪鉴定细胞来源的exosome | 第33页 |
| 2.3.3 Western blot检测p53~(+/+)mBMMSC和p53~(-/-)mBMMSC上清来源的exosome表面标记 | 第33-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-35页 |
| 第三章 P53~(-/-)mBMMSC-Exosome在胃癌发展中的作用 | 第35-55页 |
| 3.1 材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 动物 | 第35页 |
| 3.1.2 试剂 | 第35-36页 |
| 3.1.3 主要的仪器与相关器材 | 第36页 |
| 3.2 方法 | 第36-40页 |
| 3.2.1 激光共聚焦显微镜观察exosome细胞内定位 | 第36-37页 |
| 3.2.2 流式成像技术检测exosome细胞内定位 | 第37页 |
| 3.2.3 平板克隆增殖实验 | 第37页 |
| 3.2.4 Transwell迁移实验 | 第37页 |
| 3.2.5 总RNAs的提取 | 第37-38页 |
| 3.2.6 RNA逆转录 | 第38页 |
| 3.2.7 实时荧光定量PCR | 第38-39页 |
| 3.2.8 细胞蛋白的提取 | 第39页 |
| 3.2.9 Western blot | 第39页 |
| 3.2.10 裸鼠皮下瘤模型构建 | 第39页 |
| 3.2.11 免疫组化检测及结果判断 | 第39-40页 |
| 3.3 结果 | 第40-52页 |
| 3.3.1 p53~(-/-)mBMMSC-exosome对p53~(+/+)mBMMSC生物学功能的影响 | 第40-47页 |
| 3.3.1.1 p53~(+/+)mBMMSC内化p53~(-/-)mBMMSC-exosome | 第40-41页 |
| 3.3.1.2 p53~(-/-)mBMMSC-exosome促进p53~(+/+)mBMMSC的增殖 | 第41-42页 |
| 3.3.1.3 p53~(-/-)mBMMSC-exosome促进p53~(+/+)mBMMSC干性基因的表达 | 第42页 |
| 3.3.1.4 p53~(-/-)mBMMSC-exosome提高p53~(+/+)mBMMSC的迁移能力 | 第42-43页 |
| 3.3.1.5 p53~(-/-)mBMMSC-exosome促进p53~(+/+)mBMMSC细胞的EMT | 第43-44页 |
| 3.3.1.6 p53~(-/-)mBMMSC-exosome诱导后的p53~(+/+)mBMMSC促进胃癌体内成瘤能力 | 第44-47页 |
| 3.3.2 p53~(-/-)mBMMSC-exosome对MFC生物学功能的影响 | 第47-52页 |
| 3.3.2.1 p53~(-/-)mBMMSC-exosome促进MFC的增殖 | 第48页 |
| 3.3.2.2 p53~(-/-)mBMMSC-exosome促进MFC干性基因的表达 | 第48-49页 |
| 3.3.2.3 p53~(-/-)mBMMSC-exosome提高MFC的迁移能力 | 第49页 |
| 3.3.2.4 p53~(-/-)mBMMSC-exosome促进MFC的EMT | 第49-50页 |
| 3.3.2.5 p53~(-/-)mBMMSC-exosome促进MFC体内成瘤能力 | 第50-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-55页 |
| 第四章 UBR2在胃癌进展中的作用 | 第55-65页 |
| 4.1 材料 | 第55页 |
| 4.1.1 动物 | 第55页 |
| 4.1.2 试剂 | 第55页 |
| 4.1.3 主要的仪器与相关器材 | 第55页 |
| 4.2 方法 | 第55-57页 |
| 4.2.1 RNA的提取、逆转录、荧光定量PCR | 第55页 |
| 4.2.2 细胞蛋白提取、Western blot | 第55页 |
| 4.2.3 免疫组化 | 第55页 |
| 4.2.4 Nanosight分析exosome的数量 | 第55-56页 |
| 4.2.5 Exosome内总RNA的提取 | 第56页 |
| 4.2.6 UBR2干扰 | 第56页 |
| 4.2.7 平板克隆增殖实验 | 第56页 |
| 4.2.8 Transwell迁移实验 | 第56-57页 |
| 4.3 结果 | 第57-62页 |
| 4.3.1 p53~(-/-)mBMMSC细胞及其exosome中UBR2表达明显高于p53~(+/+)mBMMSC | 第57页 |
| 4.3.2 p53~(-/-)mBMMSC-exosome能传递UBR2至p53~(+/+)mBMMSC和MFC | 第57-59页 |
| 4.3.3 UBR2蛋白的功能 | 第59-62页 |
| 4.3.3.1 UBR2干扰抑制exosome的分泌 | 第59-60页 |
| 4.3.3.2 UBR2干扰降低p53~(-/-)mBMMSC细胞的增殖 | 第60页 |
| 4.3.3.3 UBR2干扰降低p53~(-/-)mBMMSC细胞的干性基因的表达 | 第60-61页 |
| 4.3.3.4 UBR2干扰抑制p53~(-/-)mBMMSC细胞的迁移能力 | 第61-62页 |
| 4.3.3.5 UBR2干扰抑制p53~(-/-)mBMMSC细胞的EMT | 第62页 |
| 4.4 讨论 | 第62-65页 |
| 第五章 P53~(-/-)mBMMSC-Exosome内UBR2在胃癌发展中的作用 | 第65-75页 |
| 5.1 材料 | 第65页 |
| 5.1.1 试剂 | 第65页 |
| 5.1.2 主要的仪器与相关器材 | 第65页 |
| 5.2 方法 | 第65-66页 |
| 5.2.1 RNA的提取、逆转录、荧光定量PCR | 第65页 |
| 5.2.2 细胞蛋白提取、Western blot | 第65页 |
| 5.2.3 UBR2干扰 | 第65页 |
| 5.2.4 平板克隆增殖实验 | 第65页 |
| 5.2.5 Transwell迁移实验 | 第65页 |
| 5.2.6 Exosome的提取 | 第65-66页 |
| 5.2.7 免疫荧光 | 第66页 |
| 5.3 结果 | 第66-73页 |
| 5.3.1 敲减UBR2后的p53~(-/-)mBMMSC-exosome对p53~(+/+)mBMMSC细胞生物学功能的影响 | 第66-69页 |
| 5.3.1.1 UBR2敲减exosome作用p53~(+/+)mBMMSC后UBR2验证 | 第66页 |
| 5.3.1.2 UBR2敲减exosome抑制p53~(+/+)mBMMSC的增殖能力 | 第66-67页 |
| 5.3.1.3 UBR2敲减exosome抑制p53~(+/+)mBMMSC干性基因的表达 | 第67-68页 |
| 5.3.1.4 UBR2敲减exosome抑制p53~(+/+)mBMMSC的迁移能力 | 第68页 |
| 5.3.1.5 UBR2敲减exosome抑制p53~(+/+)mBMMSC的EMT | 第68-69页 |
| 5.3.2 敲减UBR2后p53~(-/-)mBMMSC-exosome对MFC生物学功能的影响 | 第69-71页 |
| 5.3.2.1 UBR2敲减exosome作用MFC后UBR2表达下调 | 第69页 |
| 5.3.2.2 UBR2敲减exosome抑制MFC的增殖能力 | 第69-70页 |
| 5.3.2.3 UBR2敲减exosome抑制MFC的干性基因表达 | 第70页 |
| 5.3.2.4 UBR2敲减exosome抑制MFC的迁移能力 | 第70-71页 |
| 5.3.2.5 UBR2敲减exosome抑制MFC的EMT | 第71页 |
| 5.3.3 UBR2对Wnt/β-catenin信号通路的调控 | 第71-73页 |
| 5.4 讨论 | 第73-75页 |
| 第六章 结论与展望 | 第75-77页 |
| 6.1 结论 | 第75页 |
| 6.2 展望 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文及参加会议 | 第86页 |
| 一、发表论文 | 第86页 |
| 二、参加会议 | 第86页 |
| 三、获奖情况 | 第86页 |
