| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一章 Bm RPA43_N 蛋白研究进展 | 第14-21页 |
| 引言 | 第14页 |
| 1 A43 蛋白的发现与命名 | 第14页 |
| 2 RNAP_Rp67_N_like 超家族 | 第14-15页 |
| 3 A43 在RNA 聚合酶Ⅰ中的结构特征 | 第15-17页 |
| ·RNA 聚合酶Ⅰ | 第15页 |
| ·A43 和A14 能形成稳定的异源二聚体 | 第15-16页 |
| ·A43 亚基在RNA 聚合酶三维结构中的定位 | 第16-17页 |
| 4 A43 蛋白的生物学功能 | 第17-18页 |
| 5 微缺失综合症与TWISTNB（twist neighbor）基因 | 第18-19页 |
| ·微缺失综合症 | 第18页 |
| ·TWISTNB(twist neighbor)基因 | 第18-19页 |
| 6 研究现状及展望 | 第19-21页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第21-23页 |
| 1 研究目的和意义 | 第21页 |
| 2 主要研究内容 | 第21-22页 |
| 3 实验流程图 | 第22-23页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第23-32页 |
| 1 序列与生物信息学工具 | 第23页 |
| ·序列 | 第23页 |
| ·生物信息学工具 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-24页 |
| 3 结果 | 第24-30页 |
| ·BmRPA43_N 的基因序列及结构分析 | 第24-25页 |
| ·BmRPA43_N 的氨基酸序列分析 | 第25页 |
| ·疏水性分析 | 第25-26页 |
| ·跨膜区分析 | 第26页 |
| ·信号肽预测 | 第26-27页 |
| ·BmRPA43_N 蛋白在细胞内定位的预测功能位点预测 | 第27页 |
| ·功能位点预测 | 第27-28页 |
| ·BmRPA43_N 蛋白二级结构的预测 | 第28页 |
| ·BmRPA43_N 蛋白高级结构的预测 | 第28-29页 |
| ·BmRPA43_N 蛋白氨基酸序列同源性分析 | 第29-30页 |
| 4 讨论 | 第30-32页 |
| 第四章 BmRPA43_N 基因的克隆与原核表达 | 第32-44页 |
| 1 材料与试剂 | 第32-34页 |
| ·材料与设备 | 第32页 |
| ·试剂 | 第32页 |
| ·主要试剂的配制 | 第32-34页 |
| 2 方法 | 第34-40页 |
| ·BmRPA43_N 基因重组质粒的构建 | 第34-38页 |
| ·BmRPA43_N 基因序列的测定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌表达菌株 | 第39页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-42页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第40页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-BmRPA43_N 的双酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·序列测定 | 第41页 |
| ·pET-28a(+)-BmRPA43_N 的诱导表达 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 第五章 多克隆抗体的制备及鉴定 | 第44-56页 |
| 1 材料与试剂 | 第44-47页 |
| ·材料与设备 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44-45页 |
| ·主要试剂的配制 | 第45-47页 |
| 2 方法 | 第47-51页 |
| ·Ni 柱亲和层析纯化融合蛋白 | 第47页 |
| ·融合蛋白的FPLC 纯化和质谱鉴定 | 第47-48页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第48-49页 |
| ·抗体的效价和特异性检测 | 第49-51页 |
| 3 结果 | 第51-54页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第51-52页 |
| ·FPLC 分离纯化 | 第52页 |
| ·质谱鉴定 | 第52-53页 |
| ·抗体的效价测定 | 第53-54页 |
| ·抗体特异性检测 | 第54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 第六章 Bm RPA43_N 蛋白的表达分析 | 第56-68页 |
| 1 材料与试剂 | 第56-57页 |
| ·材料与仪器 | 第56页 |
| ·试剂 | 第56-57页 |
| ·试剂的配制 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-62页 |
| ·总蛋白的提取及定量 | 第57-58页 |
| ·Western blotting 检测 BmRPA43_N 蛋白在家蚕各发育时期的分布 | 第58页 |
| ·Western blotting 检测 BmRPA43_N 蛋白在家蚕各组织的分布 | 第58页 |
| ·总RNA 的提取及定量 | 第58-60页 |
| ·荧光定量PCR 检测BmRPA43_N 在家蚕各时期及五龄幼虫各组织中的分布 | 第60-62页 |
| 3 结果 | 第62-66页 |
| ·BmRPA43_N 在家蚕不同发育时期的转录和表达水平 | 第62-64页 |
| ·BmRPA43_N 在五龄幼虫不同组织内的转录和表达水平 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 第七章 亚细胞定位分析 | 第68-76页 |
| 1 材料与试剂 | 第68-70页 |
| ·材料 | 第68页 |
| ·试剂 | 第68页 |
| ·试剂的配制 | 第68-70页 |
| 2 方法 | 第70-72页 |
| ·细胞总RNA 的提取 | 第70页 |
| ·RT-PCR 扩增BmRPA43_N 基因 | 第70-71页 |
| ·细胞质、细胞核蛋白的提取 | 第71页 |
| ·Western blotting 检测细胞中的BmRPA43_N 蛋白 | 第71页 |
| ·亚细胞定位 | 第71-72页 |
| 3 结果 | 第72-75页 |
| ·细胞总RNA | 第72页 |
| ·RT-PCR 扩增细胞中的BmRPA43_N 基因 | 第72-73页 |
| ·Western blotting 分析 | 第73页 |
| ·亚细胞定位 | 第73-75页 |
| 4 讨论 | 第75-76页 |
| 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 在学期间发表的论文 | 第81页 |
