| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-19页 |
| 前言 | 第14页 |
| 1 CHCH 结构域的发现 | 第14页 |
| 2 CHCH 蛋白家族的结构特征 | 第14-17页 |
| ·S 亚群 | 第14-15页 |
| ·N 亚群 | 第15-16页 |
| ·C 亚群 | 第16-17页 |
| 3 CHCH 相关蛋白的生物学功能 | 第17-18页 |
| ·酵母中CHCH 相关蛋白 | 第17页 |
| ·人类中CHCH 相关蛋白 | 第17页 |
| ·小鼠中CHCH 相关蛋白 | 第17-18页 |
| ·果蝇和秀丽隐杆线虫中CHCH 相关蛋白 | 第18页 |
| 4 展望 | 第18-19页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第19-21页 |
| 1 实验目的和意义 | 第19页 |
| 2 研究内容 | 第19-20页 |
| 3 试验流程图 | 第20-21页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第21-27页 |
| 1 材料与工具 | 第21页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·生物信息学工具 | 第21页 |
| 2 方法及结果 | 第21-26页 |
| ·基因的基本信息 | 第21-22页 |
| ·疏水性分析 | 第22-23页 |
| ·跨膜分析 | 第23页 |
| ·信号肽分析 | 第23-24页 |
| ·亚细胞定位分析 | 第24页 |
| ·蛋白质的功能位点预测 | 第24页 |
| ·蛋白质的同源性比较 | 第24-26页 |
| 3 讨论 | 第26-27页 |
| 第四章 家蚕BmCH 基因的克隆与表达 | 第27-40页 |
| 1 材料与试剂 | 第27-30页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·主要试剂的配制 | 第27-30页 |
| 2 试验方法 | 第30-35页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第30-34页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第30-31页 |
| ·PCR 产物试剂盒回收 | 第31页 |
| ·PCR 产物与表达载体pET-28a 的双酶切 | 第31-32页 |
| ·胶回收酶切产物 | 第32页 |
| ·连接反应 | 第32页 |
| ·E.coli TG1、Rosetta 感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| ·连接产物的转化 | 第33页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第33-34页 |
| ·挑斑及质粒抽提 | 第33页 |
| ·PCR 鉴定 | 第33页 |
| ·双酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·BmCH 基因的表达 | 第34-35页 |
| ·转化Rosetta 表达菌株 | 第34页 |
| ·挑斑、PCR 鉴定及双酶切鉴定 | 第34页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第34-35页 |
| ·制胶 | 第34-35页 |
| ·样品处理 | 第35页 |
| ·上样 | 第35页 |
| ·电泳 | 第35页 |
| ·考马斯亮蓝染色与脱色 | 第35页 |
| 3 结果 | 第35-38页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定和PCR 扩增 | 第36-37页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第37-38页 |
| 4 讨论 | 第38-40页 |
| 第五章 融合蛋白的纯化及多克隆抗体的制备 | 第40-49页 |
| 1 材料与试剂 | 第40-42页 |
| ·材料与设备 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40-42页 |
| ·His 亲和层析纯化试剂 | 第40-41页 |
| ·Bradford 蛋白定量用试剂 | 第41页 |
| ·抗体制备用试剂 | 第41页 |
| ·ELISA 用试剂 | 第41-42页 |
| ·Western blot 试剂 | 第42页 |
| 2 方法 | 第42-46页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第42-43页 |
| ·包涵体的溶解以及样品的制备 | 第42-43页 |
| ·镍柱纯化融合蛋白 | 第43页 |
| ·Bradford 法检测蛋白浓度 | 第43页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第43-46页 |
| ·抗原的制备 | 第43-44页 |
| ·免疫新西兰兔 | 第44页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第44页 |
| ·抗体的效价测定 | 第44-45页 |
| ·抗体特异性检测 | 第45-46页 |
| 3 结果 | 第46-48页 |
| ·融合蛋白的纯化结果 | 第46页 |
| ·抗体的效价测定 | 第46-47页 |
| ·Western blot 检测抗体的特异性 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 第六章 BmCH 蛋白在家蚕中的表达分析 | 第49-60页 |
| 1 材料与试剂 | 第49-50页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·主要试剂的配制 | 第49-50页 |
| 2 方法 | 第50-54页 |
| ·总RNA 的提取 | 第50页 |
| ·DNA 酶消化 | 第50-51页 |
| ·逆转录成cDNA | 第51页 |
| ·荧光定量PCR 引物的设计 | 第51-52页 |
| ·荧光定量PCR | 第52页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第52-53页 |
| ·蛋白质的抽提 | 第53页 |
| ·Western blot 检测蛋白的分布 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-58页 |
| ·家蚕发育过程中BmCH mRNA 转录水平分析 | 第54-55页 |
| ·家蚕发育过程中BmCH 蛋白表达量的比较 | 第55-56页 |
| ·五龄幼虫各组织中BmCH mRNA 转录水平分析 | 第56-58页 |
| ·五龄幼虫各组织中BmCH 蛋白表达量的比较 | 第58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 第七章 BmCH 的亚细胞定位 | 第60-64页 |
| 1 材料与试剂 | 第60-61页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·试剂 | 第60页 |
| ·试剂配制 | 第60-61页 |
| 2 方法 | 第61页 |
| 3 结果 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-68页 |
| 致谢 | 第68页 |