| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 缩略符号 | 第13-14页 |
| 第一章 冷激蛋白的研究进展 | 第14-23页 |
| 1 前言 | 第14页 |
| 2 冷激蛋白蛋白的研究现状 | 第14-17页 |
| ·冷激蛋白的结构研究 | 第14-15页 |
| ·冷激蛋白的功能研究 | 第15页 |
| ·冷激蛋白的表达调控机制 | 第15-17页 |
| ·转录水平的调控 | 第15-16页 |
| ·mRNA 的稳定性 | 第16页 |
| ·翻译水平的调控 | 第16-17页 |
| 3 Y-box 结合蛋白的研究进展 | 第17-21页 |
| ·Y-box 结合蛋白的结构 | 第17-18页 |
| ·Y-box 结合蛋白与核酸的结合作用 | 第18-19页 |
| ·Y-box 结合蛋白的转录调控 | 第19页 |
| ·Y-box 结合蛋白在翻译水平的调控 | 第19-20页 |
| ·Y-box 结合蛋白与疾病 | 第20-21页 |
| 4 展望 | 第21-23页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第23-26页 |
| 1 研究目的和意义 | 第23页 |
| 2 实验内容 | 第23-24页 |
| 3 实验流程 | 第24-26页 |
| ·家蚕BYB 基因的克隆及表达水平的分析 | 第24-25页 |
| ·家蚕BYB 基因的转录水平的分析 | 第25-26页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第26-37页 |
| 1 生物信息学工具 | 第26页 |
| 2 方法 | 第26-27页 |
| 3 分析结果 | 第27-35页 |
| ·BYB 基因序列 | 第27-28页 |
| ·同源序列多重比对分析 | 第28-30页 |
| ·信号肽分析 | 第30页 |
| ·跨膜区分析 | 第30-31页 |
| ·疏水性分析 | 第31-32页 |
| ·二级结构预测 | 第32页 |
| ·蛋白的高级结构预测 | 第32页 |
| ·BYB 蛋白定位的预测 | 第32-33页 |
| ·功能位点的预测 | 第33页 |
| ·构建BYB 蛋白进化树 | 第33-34页 |
| ·电子表达谱预测 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 家蚕BYB 基因的克隆与原核表达 | 第37-51页 |
| 1 材料与试剂 | 第37-40页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·试剂的配制 | 第37-40页 |
| 2 实验方法 | 第40-47页 |
| ·重组质粒的构建策略 | 第40-41页 |
| ·BYB 基因的克隆 | 第41-44页 |
| ·质粒的提取 | 第41页 |
| ·PCR 扩增 | 第41-42页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第42页 |
| ·目的片段与pET-28a(+)载体双酶切与回收 | 第42-43页 |
| ·连接反应 | 第43页 |
| ·连接E. coli TG1、BL21（DE3）感受态细胞的制备（CaCl_2 法） | 第43-44页 |
| ·连接产物的转化 | 第44页 |
| ·重组pET-28a(+)-BYB 质粒的筛选与鉴定 | 第44-46页 |
| ·提取质粒 | 第44页 |
| ·PCR 鉴定 | 第44-45页 |
| ·双酶切鉴定 | 第45页 |
| ·序列测定 | 第45-46页 |
| ·重组质粒的转化及鉴定 | 第46页 |
| ·重组pET-28a(+)-BYB 质粒的表达与鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中表达 | 第46页 |
| ·蛋白凝胶电泳检测 | 第46-47页 |
| 3 结果 | 第47-49页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第47页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-BYB 的鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 第五章 重组蛋白的纯化和多克隆抗体的制备 | 第51-61页 |
| 1 材料与试剂 | 第51-53页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·订购试剂 | 第51页 |
| ·试剂和溶液配制 | 第51-53页 |
| ·His 亲和层析纯化所需试剂 | 第51页 |
| ·抗体制备用试剂 | 第51-52页 |
| ·抗体纯化用试剂 | 第52页 |
| ·ELISA 试剂 | 第52页 |
| ·Western blotting 用溶液 | 第52-53页 |
| 2 方法 | 第53-57页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| ·重组蛋白的大量表达与纯化样品制备 | 第53页 |
| ·Ni-NTA 柱纯化融合蛋白 | 第53-54页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第54-55页 |
| ·抗原的制备 | 第54页 |
| ·免疫新西兰兔 | 第54页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第54-55页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第55页 |
| ·间接ELISA 法测定抗体效价 | 第55-56页 |
| ·抗体特异性检测 | 第56-57页 |
| 3 结果 | 第57-60页 |
| ·融合蛋白表达形式的确定及蛋白纯化 | 第57-58页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第58页 |
| ·间接ELISA 法测定抗体效价 | 第58-59页 |
| ·Western blotting 检测抗体的特异性 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-61页 |
| 第六章 荧光定量PCR | 第61-68页 |
| 1 材料与试剂 | 第61页 |
| ·提取各时期及各组织样品 | 第61页 |
| ·试剂 | 第61页 |
| 2 方法 | 第61-63页 |
| ·引物设计 | 第61页 |
| ·提取总RNA | 第61-62页 |
| ·RNA 逆转录 | 第62页 |
| ·反应程序 | 第62页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第62-63页 |
| 3 结果 | 第63-67页 |
| ·家蚕发育过程中mRNA 量的变化 | 第63-65页 |
| ·五龄幼虫各组织中mRNA 量的变化 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-68页 |
| 第七章 BYB 在家蚕发育各时期及组织的分布 | 第68-72页 |
| 1 材料与试剂 | 第68-69页 |
| ·材料 | 第68页 |
| ·订购试剂 | 第68页 |
| ·试剂的配制 | 第68-69页 |
| 2 方法 | 第69-70页 |
| ·家蚕不同发育时期及5 龄幼虫不同组织总蛋白的提取 | 第69-70页 |
| ·Western blotting 检测BYB 蛋白在家蚕5 龄幼虫不同组织中的分布 | 第70页 |
| 3 结果 | 第70-71页 |
| ·Western blotting 检测家蚕发育各时期BYB 的表达量变化 | 第70页 |
| ·Western blotting 检测5 龄幼虫各组织中BYB 表达量的变化 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-72页 |
| 第八章 亚细胞定位及冷激实验 | 第72-77页 |
| 1 材料与试剂 | 第72页 |
| ·材料 | 第72页 |
| ·试剂 | 第72页 |
| ·试剂的配制 | 第72页 |
| 2 方法 | 第72-73页 |
| 3 结果 | 第73-75页 |
| 4 讨论 | 第75-77页 |
| 结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
