| 缩略词表 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 L-丝氨酸简介 | 第12页 |
| 1.2 L-丝氨酸的性质 | 第12页 |
| 1.3 L-丝氨酸的应用 | 第12-13页 |
| 1.3.1 L-丝氨酸在医药方面的应用 | 第13页 |
| 1.3.2 L-丝氨酸在食品及化妆品方面的应用 | 第13页 |
| 1.4 L-丝氨酸的生产方法 | 第13-14页 |
| 1.5 L-丝氨酸的微生物合成机制 | 第14-16页 |
| 1.5.1 微生物合成L-丝氨酸的代谢途径 | 第14-15页 |
| 1.5.2 微生物合成L-丝氨酸的调控机制 | 第15-16页 |
| 1.5.2.1 限速酶的反馈抑制 | 第15页 |
| 1.5.2.2 降解转化途径调控 | 第15-16页 |
| 1.5.2.3 转运途径调控 | 第16页 |
| 1.6 应用代谢工程改造L-丝氨酸合成途径 | 第16-20页 |
| 1.6.1 L-Ser分支途径的改造 | 第16-17页 |
| 1.6.2 L-Ser降解转化途径的改造 | 第17-18页 |
| 1.6.3 L-Ser转运途径的改造 | 第18页 |
| 1.6.4 L-Ser合成代谢的发酵调控 | 第18-20页 |
| 1.7 本论文的主要研究内容 | 第20-22页 |
| 1.7.1 立题依据和研究意义 | 第20页 |
| 1.7.2 本论文的主要研究内容 | 第20-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-36页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第22-26页 |
| 2.1.1 实验用菌株、质粒 | 第22-23页 |
| 2.1.2 实验用酶和试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第23-26页 |
| 2.1.4 实验用培养基 | 第26页 |
| 2.2 方法 | 第26-32页 |
| 2.2.1 细菌基因组DNA的提取及纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.2 引物的设计和PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.3 PCR产物的回收 | 第28页 |
| 2.2.4 TA克隆 | 第28页 |
| 2.2.5 大肠杆菌DH5α 化转感受态细胞的制备及转化 | 第28-29页 |
| 2.2.6 细菌质粒DNA的提取及纯化 | 第29页 |
| 2.2.7 用于基因敲除的大肠杆菌电转化感受态细胞的制备及转化 | 第29-30页 |
| 2.2.8 发酵培养条件 | 第30页 |
| 2.2.9 发酵参数的测定 | 第30-31页 |
| 2.2.9.1 菌体浓度测定 | 第30页 |
| 2.2.9.2 葡萄糖浓度的测定 | 第30页 |
| 2.2.9.3 发酵液中L-丝氨酸浓度的测定 | 第30-31页 |
| 2.2.10 L-Ser标准曲线的绘制： | 第31-32页 |
| 2.3 SerA抗反馈突变体SerA2的构建 | 第32-33页 |
| 2.3.1 serA基因的克隆 | 第32页 |
| 2.3.2 SerA抗反馈调节突变体SerA2的构建 | 第32页 |
| 2.3.3 serA2基因在pSC中的表达 | 第32-33页 |
| 2.4 serA2BC与pgk的共表达 | 第33-34页 |
| 2.4.1 基因serB、serC和pgk的克隆 | 第33页 |
| 2.4.2 基因serA和serB的共表达 | 第33页 |
| 2.4.3 基因serC和pgk的共表达 | 第33页 |
| 2.4.4 基因serA2BC和pgk的共表达 | 第33-34页 |
| 2.5 sdaA基因的敲除 | 第34页 |
| 2.6 sdaB、ilvA、tdcB和tdcG基因的敲除 | 第34-36页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第36-51页 |
| 3.1 SerA抗反馈突变体SerA2的构建 | 第36-38页 |
| 3.1.1 serA基因的克隆 | 第36页 |
| 3.1.2 SerA抗反馈调节突变体SerA2的构建 | 第36-37页 |
| 3.1.3 serA2基因在pSC中的表达 | 第37-38页 |
| 3.2 基因serA2BC与pgk的共表达 | 第38-43页 |
| 3.2.1 基因serB、serC和pgk的克隆 | 第38页 |
| 3.2.2 基因serA和serB的共表达 | 第38-39页 |
| 3.2.3 基因serC和pgk的共表达 | 第39-41页 |
| 3.2.4 基因serA2BC和pgk的共表达 | 第41-43页 |
| 3.3 HPLC检测发酵液中的L-Ser | 第43-44页 |
| 3.4 sdaA基因敲除菌BJ-02的构建 | 第44-45页 |
| 3.5 工程菌BJ-02/pSC-05的构建及补料分批发酵 | 第45-46页 |
| 3.6 sdaB，ilvA，tdcB，tdcG基因敲除菌的构建 | 第46-48页 |
| 3.7 工程菌BJ-11、BJ-12、BJ-13、BJ-14的构建及BJ-11、BJ-13、BJ-14的补料分批发酵 | 第48-50页 |
| 3.8 不同初始葡萄糖浓度对发酵产L-Ser的影响 | 第50-51页 |
| 第四章 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 附录 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第56页 |
